Слайд 2
Вопросы лекции
Роль нуклеиновых кислот в передаче генетической информации
Геном человека. Виды и структура генов
Репликация ДНК
Экспрессия генов: транскрипция,
трансляция
Слайд 3
Роль нуклеиновых кислот в передаче генетической информации
Слайд 4
Наследственность и изменчивость – одни из основных проявлений
жизни, обеспечивающих ее существование уже в течение 4 млрд
лет
Слайд 5
Наследственность
Наследственность – это свойство клеток и организмов в
процессе самовоспроизведения передавать новому поколению программу развития, т.е. способность
к определенному типу обмена веществ и индивидуального развития
Слайд 6
Изменчивость
Изменчивость – свойство, противоположное наследственности, заключается в способности
организмов приобретать изменения и существовать в различных вариантах
Слайд 7
Генетика – наука о наследственности и изменчивости живых
организмов
Термин «генетика» был предложен Бэтсоном в 1906 г.
Слайд 8
Наследственность и изменчивость связаны с одним и тем
же материальным субстратом
Поискам этого субстрата были посвящены работы ученых
19 – 20 веков
Слайд 9
История поисков материального субстрата наследственности
1865 г. –
Грегор Мендель – открытие законов наследственности (передача «наследственных задатков»)
1869
г. – Иоганн Мишер – открыл нуклеиновые кислоты в ядрах клеток гноя
80-е годы 19 века – описание явлений митоза и мейоза
1909 г. – Иогансен – ввел термин «ген»
Слайд 10
1888 г. – Вальдейер – ввел термин «хромосомы»
для внутриядерных окрашиваемых структур
1902-1907 гг. – Бовери, Сэттон –
связали преемственность поколений с передачей хромосом
1910-1916 гг. – Т. Морган – хромосомная теория наследственности
Слайд 11
Хромосомы – носители наследственной информации
Хромосомы
Белки
Нуклеиновые кислоты
С чем связана
наследственность – с белками или
нуклеиновыми кислотами ?
Первоначально преимущество отдавали белкам.
Слайд 12
Явление трансформации
Эксперименты Ф. Гриффита (1928 г.)
Streptococcus pneumoniae
вирулентные
авирулентные
штаммы
штаммы
Слайд 13
Эксперименты Ф. Гриффита (1928 г.)
Вывод:
от убитых вирулентных бактерий
к живым авирулентным передается трансформирующий фактор, превращающий авирулентные штаммы
в вирулентные
Слайд 14
Трансформация - это приобретение одним организмом некоторых признаков
другого организма за счет захвата части его генетической информации
Слайд 15
Трансформирующий фактор – ДНК !
1944 г. – Освальд
Эйвери и сотрудники повторили эксперименты Гриффита и доказали, что
трансформирующим фактором является ДНК.
ДНК выполняет главную роль в реализации генетической информации
Слайд 16
Эксперимент Альфреда Херши и Марты Чейз (1952)
Что
отвечает
за размножение
фагов?
Фаги
(бактериофаги) - это вирусы, размножающиеся в бактериях
Слайд 18
Суть опыта:
фаги, у которых белковая оболочка была
мечена радиоактивной серой (S35), а ДНК - радиоактивным фосфором
(Р32), инкубировали с бактериями.
Затем бактерии отмывали.
В смывных водах не обнаруживали Р32, а в бактериях – очень мало S35 Следовательно, внутрь попала только ДНК. Через несколько минут из бактерии выходили десятки полноценных фагов, содержащих и белковую оболочку, и ДНК.
Вывод: именно ДНК выполняет генетическую функцию - несет информацию как о создании новых копий ДНК, так и о синтезе фаговых белков.
Слайд 19
Трансдукция – изменение наследственных свойств бактериальных клеток путем
переноса ДНК от одного штамма другому с помощью ДНК-фага
Работы с фагами открыли явление трансдукции
Слайд 20
Опыты Френкеля-Конрата (1957)
Френкель-Конрат работал с вирусом табачной мозаики
(ВТМ). В этом вирусе содержится РНК, а не ДНК.
Было известно, что разные штаммы вируса вызывают разную картину поражения листьев табака. После смены белковой оболочки "переодетые" вирусы вызывали картину поражения, характерную для того штамма, чья РНК была покрыта чужим белком.
Не только ДНК, но и РНК может служить носителем генетической информации.
Слайд 21
Явление генетической рекомбинации у бактерий
Генетическая рекомбинация у бактерий
при конъюгации – передача части ДНК из одной клетки
в другую и изменение свойств последней (например, устойчивости к антибиотикам – антибиотикорезистентности)
Слайд 22
Явление генетической рекомбинации у бактерий
Слайд 23
На сегодняшний день существуют тысячи доказательств роли нуклеиновых
кислот в хранении и передаче наследственной информации
Описанные эксперименты являются
классическими
Слайд 24
Молекулярная биология
Mолекулярная биология - это наука о механизмах
хранения, воспроизведения, передачи и реализации генетической информации, о структуре
и функциях нерегулярных биополимеров - нуклеиновых кислот и белков
Автор термина Фрэнсис Крик
Слайд 25
Уровни организации генетического аппарата
Генный
Хромосомный
Геномный
Слайд 27
Определение понятия «ген»
Ген (греч. генос – род, происхождение)
– это элементарная функциональная единица наследственности, определяющая развитие признака
Ген
– это фрагмент молекулы ДНК, кодирующий:
структуру белка,
рРНК
или тРНК.
Наследование признаков в ряду поколений обеспечивается передачей генов
Слайд 28
Схема реализации генетической информации
ГЕН
БЕЛОК
ПРИЗНАК
Каждый признак организма связан с
функционированием
определенного белка
Слайд 29
Центральная догма молекулярной биологии (Ф.Крик, 1958)
ДНК
РНК
БЕЛОК
Репликация
ДНК
ДНК-полимераза
Транскрипция
РНК-полимераза
Трансляция
Обратная
транскрипция
Ревертаза
Белок – реципиент генетической информации
Слайд 30
Свойства каждого белка
определяются его
аминокислотным составом,
закодированным
последовательностью
нуклеотидов ДНК
Слайд 31
Химический состав и строение нуклеиновых кислот
Нуклеиновые кислоты
ДНК
РНК
дезоксирибонуклеиновая
рибонуклеиновая
Нуклеиновые кислоты
– это высокомолекулярные биополимеры,
мономерами которых являются нуклеотиды
Азотистые основания
Пентоза
ДНК Аденин (А), Гуанин (G), Дезоксирибоза
Цитозин (C), Тимин (Т)
РНК Аденин (А), Гуанин (G), Рибоза
Цитозин (C), Урацил (U)
Слайд 33
ДНК и РНК - полинуклеотиды
Нуклеотиды в цепях связаны
фосфоди-эфирными связями
Слайд 34
Открытие двойной спирали ДНК
7 марта 1953 года Джеймс
Уотсон и Фрэнсис Крик предложили модель двойной спирали ДНК
Открытие
базировалось на следующих данных:
Биофизические данные (о содержании воды)
Картина дифракции рентгеновских лучей (регулярность структуры)
Соотношение азотистых оснований
Построение молекулярных моделей
Слайд 35
Рентгенограмма В-формы ДНК, полученная Розалинд Фрэнклин в конце
1952 г
Слайд 36
Правила Чаргаффа
В ДНК всегда
А /
Т=1; Г / Ц=1;
(Г+Ц)/(А+Т) =
К - коэффициент специфичности,
постоянен для каждого вида.
Клетки человека
Очистка ДНК
Умеренное кислотное
воздействие разрывает
фосфодиэфирные связи
Хроматография для
количественного
определения каждого
нуклеотида
Слайд 37
Фрэнсис Крик и Джеймс Уотсон у модели ДНК
Слайд 38
Двойная спираль ДНК
Принципы построения ДНК
1.Нерегулярность
К регулярному сахарофосфатному остову
присоединены нерегулярно чередующиеся азотистые основания.
2. Антипараллельность
ДНК состоит из
двух антипараллельных полинуклеотидных цепей. 3`-конец одной расположен напротив 5`-конца другой – голова к хвосту (инь и ян).
3. Комплементарность
А=Т, Г≡Ц.
Пурин и пиримидин в паре образуют водородные связи.
4. Наличие регулярной вторичной структуры
Две полинуклеотидные цепи образуют правые спирали с общей осью.
Z-форма
Двойная спираль структурно подвижна
Спираль Уотсона и Крика
– В-форма: диаметр спирали 2,37 нм, высота основания 0,34 нм, шаг спирали 3,4 нм (10 пар оснований). Основная форма ДНК в клетках.
А-форма: 2,55 нм, 0,29 нм, 3,2 нм (11 пар оснований)
Z-форма: единственная левая спираль
Слайд 40
ДНК имеет борозды:
большую и малую –
для посадки в
них
белков, работающих с ДНК:
ДНК-полимеразы,
РНК-полимеразы,
регуляторных белков и т.д.
Слайд 41
Функции ДНК
1. ДНК является носителем генетической информации
Функция
обеспечивается фактом существования генетического кода.
2. Воспроизведение и передача
генетической информации в поколениях клеток и организмов
Функция обеспечивается процессом репликации.
3. Реализация генетической информации в виде белков, а также любых других соединений
Функция обеспечивается процессами транскрипции и трансляции.
Слайд 43
Единицы измерения длины нуклеиновых кислот
Единица измерения двухцепочечной молекулы
ДНК – пары оснований (bp) – base pairs)
Килобазы (Kb)
= 103 bp
Мегабазы (Мb) = 106 bp
Гигабазы (Gb) = 109 bp
Длина одноцепочечной РНК измеряется в нуклеотидах, а не в парах нуклеотидов
Слайд 44
Геном человека. Виды и структура генов
Слайд 45
Геном – это полный генетический состав клетки или
живого организма
Геномы изучает
геномика
Слайд 46
Основная характеристика ДНК – последовательность нуклеотидов
Проект «Геном человека»
был разработан в 1984 году, начал реализовываться в 1990
году
Главная цель проекта:
определение нуклеотид-
ной последовательности
ядерного генома человека
5 000 км
Слайд 47
В 2001 году была получена черновая последовательность генома
человека
Установлено:
У человека около 30 000 генов
Гены включают экзоны и
интроны (в среднем на 1 ген – 4 экзона)
Многие гены кодируют более 1 белка ( в среднем 3) – результат альтернативного сплайсинга
У человека много генов, не обнаруженных у беспозвоночных (генов антител, комплекса гистосовместимости)
Слайд 48
Структура «среднего» гена человека
Экзон
Интрон Экзон
Старт Окончание
биологической биологической
информации информации
Слайд 49
Два любых человека на 99,9 % идентичны по
нуклеотидным последовательностям, и только 0,1% отличий в последовательности обеспечивают
фенотипические различия (однонуклеотидный полиморфизм – места в геноме, где у одного А, а у другого G)
Наличие большого числа повторяющихся элементов в ДНК
Слайд 50
Хромосомная ДНК
Участки с уникальной
последовательностью
нуклеотидов
гены
Участки с
повторяющимися
последовательностями
нуклеотидов
микросателлиты – короткие
тандемные повторы
(например, САСАСАСАСА)
разбросанные по геному повто-
ряющиеся последовательности
LINE – длинные разбросанные
ядерные элементы
SINE – короткие – װ –
LTR – элементы – длинные
терминальные повторы
ДНК-транспозоны
50%
50%
Слайд 52
По числу генов мы в три раза сложнее
плодовой мушки и в два раза сложнее микроскопического червя
Caenorhabditis elegans
Слайд 53
Митохондриальный геном человека
Каждая клетка содержит ≈ 8000 копий
митохондриальных геномов
Мх геном содержит 37 генов (13 кодируют ОВ
ферменты, 24 – рРНК и тРНК)
Ген респираторного
комплекса
Ген рРНК
Ген тРНК
Слайд 54
Полный каталог генов человека не ответит на вопрос:
что делает нас
человеком?
Слайд 55
Гены синтеза
тРНК
Виды и структура генов
Гены
Регуляторные
разновидность
структурных
генов,
контролирующих
активность других
структурных генов
Гены синтеза
рРНК
Структурные
(синтеза мРНК)
Слайд 56
Гены «домашнего хозяйства» и гены «роскоши»
Гены "домашнего хозяйства"
кодируют то, что всегда нужно любой клетке независимо от
ткани
Гены гистоновых белков
Гены тРНК
Гены рРНК
Гены «роскоши" экспрессируются в клетках определенной ткани и только в определенное время
Гены синтеза белковых гормонов и др.
Слайд 57
Структура типичного белок-кодирующего гена эукариот
Место старта транскрипции
ТАТА-бокс –
место связывания
большого комплекса из 50
белков, включая факторы
транскрипции
Базальный или коровый
промотор
Промотор - особая последовательность нуклеотидов ДНК, узнаваемая РНК-полимеразой как посадочная площадка и старт синтеза РНК
….
Слайд 58
Терминатор
трансляции
Сайт
полиаденилирования
Терминатор
транскрипции
….
Слайд 59
Регуляторные участки ДНК эукариот
Энхансеры
Сайленсеры
Инсуляторы
Слайд 60
Энхансеры
Ряд факторов транскрипции («Энхансер-связывающий белок") связываются с регионами
ДНК, расположенными на расстоянии тысяч bp от контролируемого гена.
Связывание повышает уровень транскрипции гена
Энхансеры могут располагаться перед, за и даже внутри контролируемого гена
Действие энхансера, возможно, связано с тем, что энхансер-связывающий белок «задерживает» факторы транскрипции (TF) на промоторе гена
Слайд 61
Сайленсеры
Сайленсеры – это контролирующие регионы ДНК, которые подобно
энхансерам могут локализоваться очень далеко от контролируемого гена
Связывание фактора
транскрипции с сайленсером приводит к подавлению экспрессии
Слайд 62
Инсуляторы
Для предотвращения случайного воздействия энхансеров и сайленсеров на
гены, расположенные рядом с контролируемым, существуют инсуляторы
Инсуляторы – это
участки ДНК, расположенные между:
энхансером и промотором или
сайленсером и промоторов
прилежащих генов или кластеров прилежащих генов.
Слайд 64
Репликация ДНК – это процесс, состоящий в образовании
идентичных копий ДНК для передачи генетической информации в поколениях
клеток и организмов
Основной фермент процесса –
ДНК-зависимая ДНК-полимераза
ДНК → 2 ДНК
Слайд 65
Этапы репликации
Двойная спираль расплетается ферментом хеликазой
Хеликаза
Слайд 66
В молекуле ДНК эукариот одновременно образуется несколько точек
начала репликации – «репликационные пузырьки»
Репликационная вилка
(ori)
Слайд 67
Репликон - участок ДНК между двумя ori
Слайд 68
Топоизомеразы
Снижают напряжение в раскручивающейся молекуле ДНК удалением петель
ДНК
Работают по принципу ферментов рестриктаз (разрезающих две цепи ДНК)
Слайд 69
SSB – белки связывают одиночные цепи ДНК
Когда в
ДНК образуется расплавленный участок, белок покрывает его за счет
электростатических взаимодействий. При этом проявляется сродство белков друг к другу. Они покрывают ДНК сплошным слоем.
Предотвращение склеивания одиночных цепей в двойную
Слайд 70
Синтез ДНК - полуконсервативный
Полуконсервативность означает, что каждая дочерняя
ДНК состоит из одной матричной (материнской) цепи и одной
вновь синтезированной (дочерней)
+
Слайд 71
Синтез каждой дочерней цепи ДНК идет комплементарно и
антипараллельно матричной цепи и всегда в направлении
5’ →
3’
Слайд 72
ДНК-полимераза связывается с одной цепью ДНК и
начинает движение в направлении 5‘ →3', используя ее как
матрицу и собирая лидирующую цепь нуклеотидов и формируя двойную спираль. У эукариот эта молекула называется ДНК полимераза дельта (δ).
Так как синтез ДНК возможен только в направлении 5‘ →3‘, ДНК-полимераза другого типа (эпсилон, ε, у эукариот) связывается с другой матричной цепью. Этот фермент синтезирует прерывистые фрагменты полинуклеотидов (фрагменты Оказаки).
Фермент ДНК-лигаза заполняет бреши в запаздывающей цепи.
Синтез ДНК - полунепрерывный
Слайд 74
Экспрессия генов: транскрипция, трансляция
Слайд 75
Экспрессия генов
Экспрессия генов – это реализация (воспроизведение) информации,
закодированной в последовательности нуклеотидов
Экспрессия
генома
Протеом
Биохимиче-ские
процессы
Слайд 76
Прежний взгляд на экспрессию генов
Слайд 77
Современное представление
об экспрессии генов
(особенно у высших организмов)
Слайд 78
Транскрипция (ДНК → РНК)
Транскрипция - это синтез всех
видов РНК на матрице ДНК, осуществляемый ферментом ДНК-зависимой РНК-полимеразой
Слайд 79
Транскриптом
Транскриптом – совокупность всех продуцируемых ДНК-транскриптов (в основном
мРНК)
Слайд 80
Этапы транскрипции
Около 50 различных белков – факторов транскрипции
– связываются с промотором гена
Фермент РНК-полимераза связывается с комплексом
факторов транскрипции
Работая вместе они раскрывают двойную спираль ДНК
Слайд 81
РНК-полимераза копирует одну из цепей ДНК по принципу
комплементарности – образуется пре-мРНК
При достижении РНК-полимеразой терминального сигнала (специфической
последовательности нуклеотидов) фермент и пре-мРНК покидают ДНК-матрицу
Слайд 82
Функции РНК-полимеразы:
расплетание и заплетание ДНК
синтез РНК
движение вдоль цепи
ДНК
Слайд 84
Процессинг РНК
(пре-мРНК → мРНК)
Слайд 86
Трансляция (РНК → белок)
Вопрос: Как последовательность нуклеотидов определяет
последовательность аминокислот?
Ответ: с помощью молекулы транспортной РНК, специфичной
для каждой аминокислоты и для триплета нуклеотидов в мРНК, называемого кодоном.
Семейство молекул тРНК способно транслировать кодоны мРНК в последовательность аминокислот в белке.
тРНК
Слайд 87
Генетический код
Был расшифрован в 1962 году (Маршалл Ниренберг,
Генрих Маттеи, Северо Очоа)
Генетический код - это система записи
информации о последовательности расположения аминокислот в белках с помощью последовательности расположения нуклеотидов в ДНК
Слайд 88
Поскольку ДНК непосредственного участия в синтезе белка не
принимает, то код записывается на языке РНК
Слайд 89
Свойства генетического кода
1. Триплетность
Каждая аминокислота
кодируется последовательностью нуклеотидов из 3-х нуклеотидов - триплетом или
кодоном
Слайд 90
43 = 64 кодона
61 кодон –
смысловой
3 кодона
–
бессмысленные
Слайд 91
2. Вырожденность (избыточность)
Все аминокислоты, за исключением метионина и
триптофана, кодируются более чем одним триплетом:
2 АК по 1 триплету = 2
9 АК по 2 триплета = 18
1 АК 3 триплета = 3
5 АК по 4 триплета = 20
3 АК по 6 триплетов = 18
Всего 61 триплет кодирует 20 аминокислот.
Слайд 92
3. Однозначность
Каждый триплет кодирует лишь одну аминокислоту или
является терминатором трансляции.
Исключение составляет кодон AUG. У прокариот
в первой позиции он кодирует формилметионин, а в любой другой - метионин.
Слайд 93
4. Универсальность
Генетический код един для всех живущих на
Земле существ
Это является свидетельством единства происхождения и
эволюции.
Слайд 94
5. Неперекрываемость
В 1956г. Георгий Гамов предложил вариант перекрываемого
кода. Согласно Гамовскому коду, каждый нуклеотид, начиная с третьего
в гене, входит в состав 3-х кодонов. Когда генетический код был расшифрован, оказалось, что он неперекрываем, т.е. каждый нуклеотид входит в состав лишь одного кодона.
Слайд 95
Рибосомы (рРНК + белок)
Выделяют четыре класса
рибосом:
1. Прокариотические 70S.
2. Эукариотические 80S.
3. Рибосомы
митохондрий (55S - у животных, 75S - у грибов).
4. Рибосомы хлоропластов (70S у высших растений).
Слайд 96
Асп - центр специфического узнавания
Здесь происходит взаимодействие
кодон-антикодон.
Р-центр - пептидильный, донорный
Он является донором формилметионина при
инициации, или пептидила при элонгации трансляции.
А-центр - аминоацильный, акцепторный
Акцептирует формилметионин в самом начале или пептидил при элонгации трансляции.
К-центр - каталитический (фермент пептидилтрансфераза – образует пептидную связь).
Слайд 97
Этапы транскрипции (на примере прокариот)
Активация аминокислот
Инициация
Элонгация
Терминация
Слайд 98
Активация аминокислот
Активация аминокислот – это процесс их присоединения
к специфическим тРНК с затратой АТФ
Основной фермент процесса –
аминоцил-тРНК-синтетаза (АРС-аза, кодаза)
Слайд 99
Инициация
У прокариот перед каждым геном и соответственно в
мРНК перед геном имеется лидерная последовательность.
Она обязательно содержит полипуриновую
последовательность Шайна-Дальгарно, которая комплементарна 3'-концевому участку рРНК.
Малая единица рибосомы связывается с мРНК
Слайд 100
К малой субъединице, на которой уже находится мРНК,
подходит тРНК, с формилметионином (у эукариот с метионином).
В
результате образуется инициаторный комплекс:
30S субъединица рибосомы + мРНК + тРНК-формилметионин.
Слайд 101
Далее происходит ассоциация рибосомы
ЭЛОНГАЦИЯ
Аминоацильный конец формилметиониновой тРНК оказывается
в Р-центре. Второй кодон гена оказывается в Асп-центре. Соответствующая
ему аминоацил-тРНК устанавливается таким образом, что ее аминоацильный конец попадает в А-центр.
Слайд 102
Пептидилтрансфераза отрывает формилметионин в Р-центре и переносит его
в А-центр.
Образуется пептидная связь между формилметионином и аминоацил-тРНК.
Слайд 103
Рибосома претерпевает конформационные изменения и сдвигается на один
кодон (транслокация). Формилметиониновая тРНК покидает рибосому. Второй кодон оказывается
напротив Р-центра. Сюда же переходит тРНК, несущая на хвосте дипептид. В Асп-центр попадает третий кодон, а в А-центр очередная аминоацил-тРНК.
Слайд 104
Теперь в Р-центре отрывается дипептид, переносится в А-центр
и соединяется с третьей аминоацил-тРНК. Так продолжается до тех
пор, пока в Асп-центр не приходит терминирующий кодон (ТЕРМИНАЦИЯ).
Полипептид отрывается в Р-центре, переносится в А-центр и, т.к. присоединиться ему не к чему, он отрывается от рибосомы.
Рибосома диссоциирует
Слайд 105
Посттрансляционные изменения белков
Фолдинг
Протео-лиз
Химическая
модифика-ция
Удаление
вставок