Презентация на тему Основы генной инженерии

сайты рестрикции и одинаково их расщепляющие.
Метилчувствительные рестриктазы:
HpaII и

MspI (CCGG) – первый не расщепляет ДНК, если хотя бы один из остатков C метилирован;
N-метилирование остатков A – Sau3A (и GATC и GMeATC), DpnI (только GMeATC), MboI (только GATC)
Гетерошизомеры
Узнают одинаковые сайты рестрикции, но по-разному их расщепляют (KpnI - G↓GTACC, Asp7181 - GGTAC↓C)
Изокаудомеры
Узнают разные сайты рестрикции, но создают одинаковые липкие концы. Лигирование с потерей сайта рестрикции

существованию в клетках-хозяевах (репликация автономная или в составе хромосом)
Наличие

биохимических или генетических маркеров, которые позволяют обнаруживать его присутствие в клетках
Должны допускать встраивание чужеродной ДНК без нарушения своей функциональной целостности

– автономная репликация
Негативный контроль числа копий
Низкокопийные (1-2 копии на

клетку)
Высококопийные (10-100 копий на клетку)
Консервативность размера
Минимальный размер определяется элементами внутриклеточной автономии
Ограничения на размер вставки чужеродной ДНК
Совместимость разных плазмид в клетке
Группы несовместимости
Случайная сегрегация в дочерние клетки

(устойчивость ампициллину)
ori – Точка начала репликации (origin)
lacZ ‘ –

N-концевая часть гена β-галактозидазы (кодирует146 из 1021 АК- остатков), селектируемый маркер (хромогенный субстрат X-Gal)
lacI – Ген Lac-репрессора (Индуктор – IPTG)

Полилинкер

A-концы

три-, … мультимеры
Кольцевые димеры
Рекомбинантная плазмида

щелочной фосфатазы
5’
Лигирование, трансформация
5’
5’

интеграция в хромосому хозяина
Литический:
а) Двухсторонняя θ-репликация;
б) Катящееся кольцо

п.н.

2
Смесь экстрактов клеток двух штаммов содержит все компоненты капсида

фага λ

Жизнеспособный фаг λ

т.п.о. по EcoRI-сайту

ген оротидин-
5’-фосфатдекарбоксилазы
жизненноважный:
позитивный отбор
5-фтороротовая кислота (нетоксична)
5-фторурацил (токсичен)
негативный отбор

копий (1-2)

Cmr – селектируемый маркер

oriS, repE – односторонняя

репликация

cosN – сайт терминазы λ

loxP – cre-рекомбиназа фага P1

cosN

loxP

Емкость – 300 т.п.н.
Стабилен на протяжении 100 генераций

элементов у дрозофилы

клетках животных
Челночный эписомный вектор на основе вируса Эпштейна-Барр

EBNA1

– Epstein-Barr nuclear
antigen 1
OriP – Область начала репликации в клетках животных
ORI – Область начала репликации в бактериальных клетках
AMP – Ген устойчивости к ампициллину
polyA – сайт полиаденилирования

20-300 копий на клетку. Стабильно распределяются между дочерними клетками.