Презентация на тему Репликация. Прокариоты

Lehman, Maurice J. Bessman, Ernest S. Simms, and Arthur

Kornberg
Enzymatic Synthesis of Deoxyribonucleic Acid: I. PREPARATION OF SUBSTRATES AND PARTIAL PURIFICATION OF AN ENZYME FROM ESCHERICHIA COLI // J. Biol. Chem. 1958 233: 163-170.

-) 928 аминокислот;
-) 103 кДа;
-) ген polA;
-) моносубъединичный процессивный фермент (25-50 нт);
-) семейство А;
-) 3 доменная структура (2 экзонуклеазный + 1 полимеразный);
-) точность синтеза 10-4-10-5;
-) cкорость синтеза 10-20 нт/сек;
-) копийность ~ 400 мол/клетку.

517 (194 ак) - 3'-5'-экзонуклеаза
521 – 928 (408 ак)

– полимераза
324 – 928 (605 ак ) – фрагмент Кленова

1970-1976 гг.

ДНК-полимеразы E.coli: pol I

P.M., Koonin E.V., Bruford E., Blanco L., Burtis K.C.,

Christman M.F. Copeland W.C.,
Friedberg E.C., Hanaoka F., Hinkle D.C., Lawrence C.W., Nakanishi M., Ohmori H., Prakash L.,
Prakash S., Reynaud C.A., Sugino A., Todo T., Wang Z., Weill J.C., Woodgate R.
Eukaryotic DNA polymerases: proposal for a revised nomenclature
J Biol Chem. 2001. V. 276. P. 43487 43490

Функциональная специфичность, 5 классов: ДНК- и РНК-

Гомология и структурная специфичность, 6 семейств: A, B, C, D, X, Y

A, B, X, Y

A семейство pol I: E.Coli, Bacillus, ДНК-полимераза T.aquaticus, Т7 (РНК- и ДНК-), pol γ
B семейство pol α: репликативные ДНК-полимеразы эукариот, Т4 и RB69
C: RT, теломераза, РНК-зависимые РНК-полимеразы, pol III
D: эвриархеоты
X: репаративные ДНК-полимеразы эукариот, TdT
Y: специализированные ДНК-полимеразы эукариот, вирусные и ретровирусные полимеразы,
pol IV, pol V

человека
(PDB-код 3QEP)
X-семейство
ДНК-полимераза Dpo4 S.solfataricus
(PDB-код 1JX4)
Y-семейство
ДНК-полимераза HIV-1

RT, ВИЧ
(PDB-код 2HMI)
C-семейство

ДНК-полимераза Taq T. Aquaticus
(PDB-код 1TAQ)
А-семейство

(1998) Nature 391, 231-232 – D705, D882
Gangurde R et

al. (2000) J Biol Chem 275, 19685-92 –
D705, E710, D882 или D705, D882, E883

E, Glu, глутаминовая кислота

E.Coli
Klenow pol I

брешей:
после выщепления RNAase H РНК-праймеров или вследствие ник-трансляции

г.
 Kornberg T, Gefter ML DNA synthesis in cell-free extracts

of a DNA polymerase-defective mutant // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1970, 40(6): 1348–55;
Kornberg T, Gefter ML Purification and DNA synthesis in cell-free extracts: properties of DNA polymerase II // PNAS. 1971, 68(4): 761–4.

-) 783 аминокислоты;
-) 90 кДа;
-) ген polB, dinA;
-) моносубъединичный фермент;
-) семейство В;
-) 2 доменная структура (1 экзонуклеазный + 1 полимеразных = 2-783 ак);
-) имеет полимеразную, корректирующую и праймазную активности;
-) точность синтеза 2*10-6, частота внесения делеций 10-6;
-) скорость синтеза 0,5-1 нт/сек;
-) копийность ~ 30 – 50 → 350-1000 мол/клетку.

г.
 Kornberg T, Gefter ML Purification and DNA synthesis in

cell-free extracts: properties of DNA polymerase II // PNAS. 1971, 68(4): 761–4;
Gefter ML, Hirota Y, Kornberg T, Wechsler JA, Barnoux C. Analysis of DNA polymerases II and 3 in mutants of Escherichia coli thermosensitive for DNA synthesis // PNAS. 1971, 68(12):3150-3.

-) многосубъединичный фермент;
-) семейство С;
-) имеет полимеразную и корректирующую активности;
-) точность синтеза ~10-8 (скорость накопления мутаций за 1 раунд репликации Т4 , геном 168,903 bp , ~1,7 bp / 10-8 nt;
-) скорость синтеза 2-4 нт/сек;
-) копийность ~ 5 – 10 мол/клетку.

Кэрнсу, 1963 г.




радиоавтограф
радиоавтограф
интерпретация
интерпретация

R, Okazaki T, Sakabe K, Sugimoto K, Sugino A.

Mechanism of DNA chain growth. I. Possible discontinuity and unusual secondary structure of newly synthesized chains // PNAS 1968, 59(2):598-605.

Sugimoto K, Okazaki T, Okazaki R. Mechanism of DNA chain growth, II. Accumulation of newly synthesized short chains in E. coli infected with ligase-defective T4 phages // PNAS 1968, 60(4):1356-62.

Рейджи Оказаки
1930-1975 гг.

Тцунеко Оказаки
1933г.

Kornberg Active Center of DNA Polymerase // Science 1969,

163(3874): 1410-1418.

"The operations are localized and arranged in multiple sites within a single area of the molecule."