Что такое findslide.org?

FindSlide.org - это сайт презентаций, докладов, шаблонов в формате PowerPoint.

Для правообладателей

Обратная связь

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Яндекс.Метрика

Презентация на тему Анализ нуклеиновых кислот. Молекулярное клонирование

Содержание

Молекулярное клонированиеЭтапы Вырезание интересующего участка ДНК с помощью эндонуклеаз рестрикции (рестриктаз) Встраивание его в вектор с помощью ДНК-лигаз Введение рекомбинантной ДНК в клетку Отбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНК
Анализ нуклеиновых кислот Занятие 1 Молекулярное клонированиеЭтапы Вырезание интересующего участка ДНК с помощью эндонуклеаз рестрикции (рестриктаз) Встраивание Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции- 3 субъединицы: R, M, S – до 700 кДа- Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGGATCCNN-3’3’-NNCCTAGGNN-5’5’-NNAGATCTNN-3’3’-NNTCTAGANN-5’BamH IBgl II5’-NNNGATCNNN-3’3’-NNNCTAGNNN-5’Mbo I5’-NNNGATCNNN-3’3’-NNNCTAGNNN-5’Dpn I* * ** Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикцииИзошизомеры – рестриктазы, узнающие одинаковые сайты.GATCMbo I – A Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGAATTCNN-3’3’-NNCTTAAGNN-5’EcoR IpH 7.3, NaCl, MgCl2* * Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGAATTCNN-3’3’-NNCTTAAGNN-5’EcoR IpH 7.3, NaCl, MgCl25’-NNNAATTNNN-3’3’-NNNTTAANNN-5’Вторичная («штриховая») активность:↓[NaCl], Mg → Mn* * Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGACCGNNNNNNNNNNNN-3’3’-NNCTGGCNNNNNNNNNNNN-5’HgaI (подтип IIS) 5 10 Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGACCGNNNNNNNNNNNN-3’3’-NNCTGGCNNNNNNNNNNNN-5’HgaI (подтип IIS) 5 10 Разрезание 1-цепочечной ДНК в нужном месте Молекулярное клонированиеДНК-лигазы Наиболее распространенная – из фага T4 Соединяет 5’-фосфат и 3’-OH Молекулярное клонирование Методы получения рекомбинантных ДНК Коннекторный Рестриктазно-лигазный С помощью линкеров Молекулярное клонированиеВекторыВ качестве векторов используются плазмиды хромосомы вирусов фрагменты эукариотических хромосом Молекулярное клонированиеВекторыНеобходимые свойства векторной молекулы Возможность встраивания чужеродной ДНК Способность размножаться в Молекулярное клонированиеВведение рекомбинантной ДНК в клетку –трансформация Биологические - вирусы Молекулярное клонированиеОтбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНК Гены устойчивости к антибиотикам Гены ферментов Молекулярное клонированиеОтбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНКМаркер на основе гена LacZ из лактозного оперонаβ - галактозидаза Молекулярное клонированиеОтбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНКX-gal (5-бром-4-хлор-3-индоил-β-D-галактопиранозид) Молекулярное клонированиеОтбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНКМаркер на основе гена LacZ из лактозного Молекулярное клонированиеПлазмидный вектор pBR322 Молекулярное клонированиеПлазмидный вектор pUC19 Молекулярное клонированиеПлазмидный вектор pUC19 Молекулярное клонированиеПлазмидный вектор pUC19 Полимеразная цепная реакция. Полимеразная цепная реакция.Компоненты: ДНК-матрица Два праймера, комплементарные концам интересующего фрагмента Термостабильная ДНК-полимераза Дезоксирибонуклеотидтрифосфаты Буферный раствор Полимеразная цепная реакция.minutes Выделение плазмидной ДНКМетод щелочного лизиса Бирнбойма–Доли Лизоцим → разрушение клеточной Определение концентрации НКФотометрическая абсорбция- максимум поглощения при 260 нм
Слайды презентации

Слайд 2 Молекулярное клонирование
Этапы
Вырезание интересующего участка ДНК с помощью

Молекулярное клонированиеЭтапы Вырезание интересующего участка ДНК с помощью эндонуклеаз рестрикции (рестриктаз)

эндонуклеаз рестрикции (рестриктаз)

Встраивание его в вектор с помощью

ДНК-лигаз

Введение рекомбинантной ДНК в клетку

Отбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНК

Слайд 3 Молекулярное клонирование
Эндонуклеазы рестрикции
- 3 субъединицы: R, M, S

Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции- 3 субъединицы: R, M, S – до 700

– до 700 кДа
- требуют ATP, SAM, Mg2+
- разрезают

на значительном и случайном
расстоянии от сайта узнавания

гомодимеры ≈2×30 кДа
- требуют только Mg2+
разрезают в пределах сайта узнавания
в сторго определенном месте

по строению напоминает I тип
требуют ATP, Mg2+
разрезают на расстоянии ≈24–27 нуклеотидов
от сайта узнавания

Разделяют на 3 типа:

I




II




III

Слайд 4 Молекулярное клонирование
Эндонуклеазы рестрикции
5’-NNGGATCCNN-3’
3’-NNCCTAGGNN-5’
5’-NNAGATCTNN-3’
3’-NNTCTAGANN-5’
BamH I
Bgl II
5’-NNNGATCNNN-3’
3’-NNNCTAGNNN-5’
Mbo I
5’-NNNGATCNNN-3’
3’-NNNCTAGNNN-5’
Dpn I
*

*

Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGGATCCNN-3’3’-NNCCTAGGNN-5’5’-NNAGATCTNN-3’3’-NNTCTAGANN-5’BamH IBgl II5’-NNNGATCNNN-3’3’-NNNCTAGNNN-5’Mbo I5’-NNNGATCNNN-3’3’-NNNCTAGNNN-5’Dpn I* * **

*

*

Слайд 5 Молекулярное клонирование
Эндонуклеазы рестрикции
Изошизомеры – рестриктазы, узнающие одинаковые сайты.
GATC

Mbo

Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикцииИзошизомеры – рестриктазы, узнающие одинаковые сайты.GATCMbo I – A

I – A не метилирован
Dpn I

– A метилирован
Sau IIIa – наличие метилирования A безразлично

Гетерошизомеры – изошизомеры, разрезающие
по-разному.

Пример: Mbo I и Dpn I

Слайд 6 Молекулярное клонирование
Эндонуклеазы рестрикции
5’-NNGAATTCNN-3’
3’-NNCTTAAGNN-5’
EcoR I
pH 7.3, NaCl, MgCl2
*

*

Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGAATTCNN-3’3’-NNCTTAAGNN-5’EcoR IpH 7.3, NaCl, MgCl2* *

Слайд 7 Молекулярное клонирование
Эндонуклеазы рестрикции
5’-NNGAATTCNN-3’
3’-NNCTTAAGNN-5’
EcoR I
pH 7.3, NaCl, MgCl2
5’-NNNAATTNNN-3’
3’-NNNTTAANNN-5’
Вторичная («штриховая»)

Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGAATTCNN-3’3’-NNCTTAAGNN-5’EcoR IpH 7.3, NaCl, MgCl25’-NNNAATTNNN-3’3’-NNNTTAANNN-5’Вторичная («штриховая») активность:↓[NaCl], Mg → Mn* *

активность:
↓[NaCl], Mg → Mn
*

*

Слайд 8 Молекулярное клонирование
Эндонуклеазы рестрикции
5’-NNGACCGNNNNNNNNNNNN-3’
3’-NNCTGGCNNNNNNNNNNNN-5’
HgaI (подтип IIS)
5


Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGACCGNNNNNNNNNNNN-3’3’-NNCTGGCNNNNNNNNNNNN-5’HgaI (подтип IIS) 5 10

Слайд 9 Молекулярное клонирование
Эндонуклеазы рестрикции
5’-NNGACCGNNNNNNNNNNNN-3’
3’-NNCTGGCNNNNNNNNNNNN-5’
HgaI (подтип IIS)
5


Молекулярное клонированиеЭндонуклеазы рестрикции5’-NNGACCGNNNNNNNNNNNN-3’3’-NNCTGGCNNNNNNNNNNNN-5’HgaI (подтип IIS) 5 10 Разрезание 1-цепочечной ДНК в нужном месте

10
Разрезание 1-цепочечной ДНК в нужном месте

Слайд 10 Молекулярное клонирование
ДНК-лигазы
Наиболее распространенная – из фага T4

Молекулярное клонированиеДНК-лигазы Наиболее распространенная – из фага T4 Соединяет 5’-фосфат и

Соединяет 5’-фосфат и 3’-OH
Требует ATP, Mg2+
Лигирует липкие

и тупые концы

Слайд 11 Молекулярное клонирование
Методы получения рекомбинантных ДНК
Коннекторный
Рестриктазно-лигазный

Молекулярное клонирование Методы получения рекомбинантных ДНК Коннекторный Рестриктазно-лигазный С помощью линкеров

С помощью линкеров

Слайд 12 Молекулярное клонирование
Векторы
В качестве векторов используются
плазмиды

хромосомы вирусов

Молекулярное клонированиеВекторыВ качестве векторов используются плазмиды хромосомы вирусов фрагменты эукариотических хромосом

фрагменты эукариотических хромосом

Слайд 13 Молекулярное клонирование
Векторы
Необходимые свойства векторной молекулы
Возможность встраивания чужеродной

Молекулярное клонированиеВекторыНеобходимые свойства векторной молекулы Возможность встраивания чужеродной ДНК Способность размножаться

ДНК

Способность размножаться в клетках хозяина
и передаваться

в следующие поколения

Наличие селектируемых маркеров

Желательно для вектора на основе плазмиды:

Ослабленный контроль репликации

Слайд 14 Молекулярное клонирование
Введение рекомбинантной ДНК в клетку –трансформация
Биологические

Молекулярное клонированиеВведение рекомбинантной ДНК в клетку –трансформация Биологические - вирусы -

- вирусы
- клеточные рецепторы

Химические

- ионы металлов
(Ca2+, Rb2+)
- диэтиламиноэтил-декстран
- липосомы

Физические
- электропорация
- лазер

Механические
- микроинъекция
- бомбардировка

Методы:

Слайд 15 Молекулярное клонирование
Отбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНК
Гены устойчивости

Молекулярное клонированиеОтбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНК Гены устойчивости к антибиотикам Гены ферментов

к антибиотикам
Гены ферментов

Слайд 16 Молекулярное клонирование
Отбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНК
Маркер на основе

Молекулярное клонированиеОтбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНКМаркер на основе гена LacZ из лактозного оперонаβ - галактозидаза

гена LacZ из лактозного оперона
β - галактозидаза

Слайд 17 Молекулярное клонирование
Отбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНК
X-gal (5-бром-4-хлор-3-индоил-β-D-галактопиранозид)

Молекулярное клонированиеОтбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНКX-gal (5-бром-4-хлор-3-индоил-β-D-галактопиранозид)

Слайд 18 Молекулярное клонирование
Отбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНК
Маркер на основе

Молекулярное клонированиеОтбор клеток, содержащих рекомбинантную ДНКМаркер на основе гена LacZ из

гена LacZ из лактозного оперона
В плазмидном векторе:
LacZ’ –

5’-концевой участок LacZ → α-донор

В клетке:
мутация в 5’-концевой области LacZ → α-акцептор


Взаимная комплементация

Слайд 19 Молекулярное клонирование
Плазмидный вектор pBR322

Молекулярное клонированиеПлазмидный вектор pBR322

Слайд 20 Молекулярное клонирование
Плазмидный вектор pUC19

Молекулярное клонированиеПлазмидный вектор pUC19

Слайд 21 Молекулярное клонирование
Плазмидный вектор pUC19

Молекулярное клонированиеПлазмидный вектор pUC19

Слайд 22 Молекулярное клонирование
Плазмидный вектор pUC19

Молекулярное клонированиеПлазмидный вектор pUC19

Слайд 23 Полимеразная цепная реакция
.

Полимеразная цепная реакция.

Слайд 24 Полимеразная цепная реакция
.
Компоненты:

ДНК-матрица
Два праймера, комплементарные

Полимеразная цепная реакция.Компоненты: ДНК-матрица Два праймера, комплементарные концам интересующего фрагмента Термостабильная ДНК-полимераза Дезоксирибонуклеотидтрифосфаты Буферный раствор

концам
интересующего фрагмента
Термостабильная ДНК-полимераза
Дезоксирибонуклеотидтрифосфаты
Буферный

раствор

Слайд 25 Полимеразная цепная реакция
.
minutes

Полимеразная цепная реакция.minutes

Слайд 26 Выделение плазмидной ДНК
Метод щелочного лизиса Бирнбойма–Доли
Лизоцим

Выделение плазмидной ДНКМетод щелочного лизиса Бирнбойма–Доли Лизоцим → разрушение клеточной стенки

→ разрушение клеточной стенки
SDS

→ разрушение мембраны
pH 12 → денатурация хромосомной ДНК
pH 5 → ренатурация плазмидной ДНК
центрифугирование
  • Имя файла: analiz-nukleinovyh-kislot-molekulyarnoe-klonirovanie.pptx
  • Количество просмотров: 152
  • Количество скачиваний: 0
- Предыдущая Электрический ток в различных средах
Следующая - Гемостаз, ДВС-синдром

Похожие презентации

Естественный отбор и его роль в эволюции Естественный отбор и его роль в эволюции 119
Вирусы. Гипотезы о происхождении вирусов Вирусы. Гипотезы о происхождении вирусов 166
Органы животных Органы животных 178
Презентация по биологии на тему:Интересные факты о группе крови Презентация по биологии на тему:Интересные факты о группе крови 166
Загальна характеристика класу Павукоподібні Загальна характеристика класу Павукоподібні 126
Презентация по биологии на тему Саңырауқұлақтар дүниесі(6 класс) Презентация по биологии на тему Саңырауқұлақтар дүниесі(6 класс) 286
Ель, сосна – хвойные деревья Ель, сосна – хвойные деревья 128
Гормоны. Характерные свойства. Виды гормонов Гормоны. Характерные свойства. Виды гормонов 140
Кровь. Переливание крови Кровь. Переливание крови 112
Генетика человека Генетика человека 141
Признаки живых организмов Признаки живых организмов 123
Молодёжь за здоровый образ, Здоровый образ жизни – фундамент всех будущих достижений Молодёжь за здоровый образ, Здоровый образ жизни – фундамент всех будущих достижений 150
Гепарды Гепарды 115
Генетические факторы, их воздействие на здоровье Генетические факторы, их воздействие на здоровье 120
Генетика 9 класс Генетика 9 класс 189
Диплодок Диплодок 150
Презентация по биологии на тему: Закономерности наследования признаков. Презентация по биологии на тему: Закономерности наследования признаков. 162
Ботаніка. Видозміни пагонів та листків Ботаніка. Видозміни пагонів та листків 138
Звуки леса Звуки леса 152
Ткани животных и растений Ткани животных и растений 134
Разнообразие растений Разнообразие растений 150
Презентация по биологии Строение клетки. Ядро. Органоиды Презентация по биологии Строение клетки. Ядро. Органоиды 191
Профилактика ОРВИ и гриппа Профилактика ОРВИ и гриппа 109
БИОЦЕНОЗ В БИОЛОГИИ БИОЦЕНОЗ В БИОЛОГИИ 159
Токсикокинетика чужеродных соединений. Закономерности распределения веществ в организме. (Лекция 4) Токсикокинетика чужеродных соединений. Закономерности распределения веществ в организме. (Лекция 4) 121
Мегафауна: животные, которых мы потеряли Мегафауна: животные, которых мы потеряли 156
Качество питьевой воды Качество питьевой воды 135
Размножение Размножение 108
Презентация к уроку по биологии на тему Внешнее строение птиц Презентация к уроку по биологии на тему Внешнее строение птиц 125
Низшие растения - водоросли Низшие растения - водоросли 166