Что такое findslide.org?

FindSlide.org - это сайт презентаций, докладов, шаблонов в формате PowerPoint.


Для правообладателей

Обратная связь

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Яндекс.Метрика

Презентация на тему Разделение белков и пептидов

Содержание

Анализ и выделение пептидов (белков)Препаративное разделение – выделение одного или нескольких компонентов смеси в индивидуальном состоянииАналитическое разделение – идентификация и количественное определение компонентов в смеси (в том числе химическая и стереохимическая чистота) Аналитическое разделение может предшествовать препаративному
Разделение белков и пептидов  (полученных при специфическом расщеплении) Анализ и выделение пептидов (белков)Препаративное разделение – выделение одного или нескольких компонентов Методы разделенияОбращенно-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография - используется для разделения белков и пептидов, Чем белки (пептиды) отличаются друг от друга? Принципиальная схема колоночной хроматографииУравновешиваниеНанесение образца и промывкаЭлюцияРегенерация Ионнообменная хроматографияПринцип – взаимодействие зарядов белка (пептида) с заряженными группами на поверхности Ионнообменная хроматография на СМ-целлюлозе Гидрофобная хроматографияПринцип – взаимодействие гидрофобных групп носителя с гидрофобными областями (АК) пептида Афинная хроматографияЗадача – выделить белок (пептид) с низким содержанием в смеси (клеточный Афинная хроматография С-реактивного белкаВ ответ на инфекцию или повреждение тканей резко увеличивается Гель-хроматография (гель-фильтрация)Принцип – разделение по молекулярной массе белков (пептидов)Носитель: гидрофильные декстраны с ЭлекторофорезЭлектрофорез белков — способ разделения смеси белков на фракции или индивидуальные белки.Электрофорез 2-D электрофорезДвумерный электрофорез (2-DE 2-D электрофорез) используется для анализа белковых молекул. Смесь Хемоспецифическая хроматографияS-S-S-SS-SS-SHS-HS--SHЗадача – селективное выделение из смеси пептидов, содержащих определенные функцианальные группы
Слайды презентации

Слайд 2 Анализ и выделение пептидов (белков)
Препаративное разделение – выделение

Анализ и выделение пептидов (белков)Препаративное разделение – выделение одного или нескольких

одного или нескольких компонентов смеси в индивидуальном состоянии

Аналитическое разделение

– идентификация и количественное определение компонентов в смеси (в том числе химическая и стереохимическая чистота)

Аналитическое разделение может предшествовать препаративному с целью выбора метода разделения и определения его оптимальных условий.

Слайд 3 Методы разделения
Обращенно-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография - используется для

Методы разделенияОбращенно-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография - используется для разделения белков и

разделения белков и пептидов, наиболее популярный вариант ВЭЖХ

Ионообменная хроматография

– один широко используемых в практике методов выделения

Гель-проникающая хроматография (гель фильтрация) – разделение на основе молекулярной массы

Аффинная хроматография – разделение с использованием биоспецифических лигандов

Электрофорез – разделение белков и пептидов на основе различной подвижности в электрическом поле

Многомерное разделение – 2D-электрофорез и многомерная хроматография наиболее скрупулезный метод анализа

Слайд 4 Чем белки (пептиды) отличаются друг от друга?

Чем белки (пептиды) отличаются друг от друга?

Слайд 5 Принципиальная схема колоночной хроматографии
Уравновешивание
Нанесение образца и промывка
Элюция
Регенерация

Принципиальная схема колоночной хроматографииУравновешиваниеНанесение образца и промывкаЭлюцияРегенерация

Слайд 6 Ионнообменная хроматография
Принцип – взаимодействие зарядов белка (пептида) с

Ионнообменная хроматографияПринцип – взаимодействие зарядов белка (пептида) с заряженными группами на

заряженными группами на поверхности носителя.

Носитель:
Для небольших пептидов проводят хроматографирование

на полимерных катионитах (сульфированный сополимер стирола и дивинилбензола) или анионитах ( -N+R3)

Для выделения крупных пептидов (белков) используют носители (целлюлоза, декстран, агароза) способные набухать в водной среде, тем самым обеспечивать лучшие условия проницаемости крупных молекул по сравнению со смолами на основе полистирола.

Слайд 7 Ионнообменная хроматография на СМ-целлюлозе

Ионнообменная хроматография на СМ-целлюлозе

Слайд 8 Гидрофобная хроматография
Принцип – взаимодействие гидрофобных групп носителя с

Гидрофобная хроматографияПринцип – взаимодействие гидрофобных групп носителя с гидрофобными областями (АК)

гидрофобными областями (АК) пептида (белка)
Носитель: силикагель с привитыми гидрофобными

цепями
(или группами)

Идеален для разделения смесей небольших пептидов (например после ферментативного расщепления)
Высокая скорость разделения
Воспроизводимость
Высокая чувствительность (небольшие количества)

Слайд 9 Афинная хроматография
Задача – выделить белок (пептид) с низким

Афинная хроматографияЗадача – выделить белок (пептид) с низким содержанием в смеси

содержанием в смеси (клеточный экстракт, биологические жидкости)
Принцип – биоспецифическое

связывание (сродство) лиганда и белка

Носитель: инертный пористый материал (агароза, полиакриламид, кросс-сшитый декстран, стеклянные шарики), к которому ковалентно через спейсер присоединен лиганд.

Лиганд (моноспецифический): гормоны (рецепторы), ингибиторы ферментов или аналоги ферментных субстратов (ферменты), антитела (антигены), белки (рекомбинантные белки), лектины (гликопротеины), фосфорилхолин (С-реактивный белок).

Слайд 10 Афинная хроматография С-реактивного белка
В ответ на инфекцию или

Афинная хроматография С-реактивного белкаВ ответ на инфекцию или повреждение тканей резко

повреждение тканей резко увеличивается концентрация некоторых белков плазмы крови

, имеющих общее название "белки острой фазы". К этим белкам относится и C-реактивный белок ( CRP , от англ. C-reactive protein ). С-реактивный белок появляется в сыворотке вскоре после повреждения тканей и начала воспаления.

CRP человека состоит из пяти идентичных, нековалентно связанных полипептидных цепей, образующих замкнутый пентамер. Важное свойство CRP - способность связываться с фосфорилхолином.

Биоспецифический сорбент

фосфорилхолин



Слайд 11 Гель-хроматография (гель-фильтрация)
Принцип – разделение по молекулярной массе белков

Гель-хроматография (гель-фильтрация)Принцип – разделение по молекулярной массе белков (пептидов)Носитель: гидрофильные декстраны

(пептидов)

Носитель: гидрофильные декстраны с поперчными сшивками (сефадексы) и полиакриламидные

гели (биогели), которые различаются размером гранул и частотой поперечных сшивок. Выбор носителя определяется молкулярной массой разделяемых пептидов (белков)

Недостаток – невозможно разделить молекулы с близкими массами!!!

Слайд 12 Электорофорез
Электрофорез белков — способ разделения смеси белков на

ЭлекторофорезЭлектрофорез белков — способ разделения смеси белков на фракции или индивидуальные

фракции или индивидуальные белки.
Электрофорез белков применяют как для анализа

компонентов смеси белков, так и для получения гомогенного белка.

Проблема: электрофоретическая подвижность зависит от заряда белка и его молекулярной массы (пространственной конфигурации)

Наиболее распространенным вариантом электрофоретического анализа белков, является электрофорез белков в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE, 1970 году Лэммли (U. K. Laemmli)).

1. белки после обработки SDS находятся в полностью денатурированном состоянии;
2. количество молекул SDS, связанных с полипептидом, пропорционально его длине, и, следовательно, молекулярной массе;
3. собственный заряд полипептида несущественен в сравнении с зарядом связанного с ним SDS.
4. Полипептиды имеют одинаковый удельный заряд и разделяются обратно пропорционально логарифму их молекулярной массы.

SDS

Для визуализации результатов электрофореза чаще всего используют окрашивание гелей красителем Кумасси (Coomassie blue) или серебром


Слайд 13 2-D электрофорез
Двумерный электрофорез (2-DE 2-D электрофорез) используется для

2-D электрофорезДвумерный электрофорез (2-DE 2-D электрофорез) используется для анализа белковых молекул.

анализа белковых молекул. Смесь белков разделяется в двух направлениях

по 2 различным свойствам. К таким свойствам относятся – изоэлектрическая точка, масса белка в нативном и денатурированном состоянии.
Двумерный электрофорез начинается с одномерного, а затем разделенные молекулу подвергаются второму разделению в направлении 90 градусов по направлению к первому форезу.
Мало вероятно что 2 молекулы будут обладать двумя одинаковыми индивидуальными свойствами, поэтому белки более эффективно разделяются 2-D электрофорезом, чем обычным электрофорезом.

Изоэлектрическая точка (IEP) – значение рН при котором молекула не заряжена (нейтральна).

Разделение по изоэлектрической точке
Разделение белков (пептидов) по IEP называется изоэлектрическое фокусирование (IEF). Белки распределяются по гелю в первом направлении и «накапливаются в изоэлектрической точке (заряд белка нейтральный)
2. Разделение по массе
Используется стандартный SDS-электрофорез в направлении перпендикулярном первому.

Разделение по заряду


Разделение по размеру
(SDS PAGE)


  • Имя файла: razdelenie-belkov-i-peptidov.pptx
  • Количество просмотров: 145
  • Количество скачиваний: 0