Что такое findslide.org?

FindSlide.org - это сайт презентаций, докладов, шаблонов в формате PowerPoint.


Для правообладателей

Обратная связь

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Яндекс.Метрика

Презентация на тему Технология рекомбинации ДНК

Содержание

Herbert Boyer Courtesy Genentech Stanley Cohen, Stanford University professor Показали, что объединив генетические элементы из разных источников (организмов), можно создать новую реплицирующуся генетическую структуру с новыми свойствами.
ТЕХНОЛОГИЯ РЕКОМБИНАции ДНКМОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ или ГЕННАЯ ИНЖЕНЕРИЯ Herbert Boyer Courtesy Genentech Stanley Cohen, Stanford University professor Показали, что объединив Общий принцип рекомбинации ДНК ОСНОВНЫЕ СТАДИИ ТЕХНОЛОГИИ РЕКДНК  в биотехнологическом производстве ЛС Ферменты, используемые в технологии рекомбинации ДНКРЕСТРИЦИРУЮЩИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ (рестриктазы) ДНК-лигаза БАКТЕРИОФАГА Т4 ТАТАТТGACТАССайт-промоторСайт-терминацииИНИЦИАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ Терминация транскрипции АТТ АТСПри молекулярном клонировании важно, чтобы расщепление донорной Расщепление ДНК  рестриказой EcoRI  Образование «липких» концовEcoRIEcoRIгуанин Рестриктазы и расщепляемые ими последовательности ДНКкрупнощепящаякрупнощепящаякрупнощепящаямелкощепящаямелкощепящая Расщепление ДНК рестриказой Hind IIHind IIHind II«т у п ы е» ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHIФрагменты ДНК «слона»Фрагменты ДНК «лягушки»рекДНКрекДНК Лигирование липких концов ДНК-лигазой Т4 Лигирование  тупых  концов ДНК-лигазой Т4 Расщепление молекул ДНК рестриктазой и соединение полученных фрагментов ДНК-лигазой. Объединение разных молекул ДНК само по себе бесполезно, если вновь образованные рекДНК Клонирующие векторыVehicle – англ. , повозка , транспортное средство Вектор  (в технологии рекДНК)Это молекула ДНК, способная самостоятельно реплицироваться в клетках Плазмидные векторы ПЛАЗМИДЫ Плазмидный вектор pBR322  создатели - Боливар Ф., Родригес Р. Технология рекомбинации ДНК  с применением плазмидного вектораклеток E. Coli или др. реципиентов ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗОВАВШИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHIФрагменты ДНК плазмидыФрагменты донорной ДНК рекДНКрекДНК Модификации плазмидных векторовДля всех рутинных процедур молекулярного клонирования широко используют E.coli в Векторы на основе бактериофага Структура бактериофага λ Escherichia coli. Схема Бактериофаг λ Escherichia coli «Портрет» электронномикроскопический Инфицирование фагом λ клетки E.coliПосле адсорбции фага на поверхности клетки белковый отросток После проникновения фага λ в клетку кишечной палочки возможны 2 сценария развития событий: лизис или лизогения
Слайды презентации

Слайд 2 Herbert Boyer Courtesy Genentech
Stanley Cohen,
Stanford University

Herbert Boyer Courtesy Genentech Stanley Cohen, Stanford University professor Показали, что

professor
Показали, что объединив генетические элементы из разных источников

(организмов), можно создать новую реплицирующуся генетическую структуру с новыми свойствами.

Слайд 3 Общий принцип рекомбинации ДНК

Общий принцип рекомбинации ДНК

Слайд 4 ОСНОВНЫЕ СТАДИИ ТЕХНОЛОГИИ РЕКДНК в биотехнологическом производстве ЛС

ОСНОВНЫЕ СТАДИИ ТЕХНОЛОГИИ РЕКДНК в биотехнологическом производстве ЛС

Слайд 5 Ферменты, используемые в технологии рекомбинации ДНК
РЕСТРИЦИРУЮЩИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ (рестриктазы)

Ферменты, используемые в технологии рекомбинации ДНКРЕСТРИЦИРУЮЩИЕ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ (рестриктазы) ДНК-лигаза БАКТЕРИОФАГА Т4

ДНК-лигаза БАКТЕРИОФАГА Т4


Слайд 6 ТАТА
ТТGAC
ТАС
Сайт-промотор
Сайт-терминации
ИНИЦИАЦИЯ
ТРАНСКРИПЦИИ
Терминация
транскрипции
АТТ АТС
При молекулярном клонировании

ТАТАТТGACТАССайт-промоторСайт-терминацииИНИЦИАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ Терминация транскрипции АТТ АТСПри молекулярном клонировании важно, чтобы расщепление

важно, чтобы расщепление донорной и векторной ДНК происходило в

строго определенных участках ДНК (сайтах) с образованием дискретного и воспроизводимого набора нуклеотидов.

Ген регуляции

Если разрез ДНК окажется внутри гена, то такой разрез приведет к его инактивации


Слайд 7 Расщепление ДНК рестриказой EcoRI

Образование «липких» концов

EcoRI
EcoRI
гуанин

Расщепление ДНК рестриказой EcoRI Образование «липких» концовEcoRIEcoRIгуанин

Слайд 8 Рестриктазы и расщепляемые ими последовательности ДНК
крупнощепящая
крупнощепящая
крупнощепящая
мелкощепящая
мелкощепящая

Рестриктазы и расщепляемые ими последовательности ДНКкрупнощепящаякрупнощепящаякрупнощепящаямелкощепящаямелкощепящая

Слайд 9 Расщепление ДНК рестриказой Hind II
Hind II
Hind II
«т у

Расщепление ДНК рестриказой Hind IIHind IIHind II«т у п ы е» к о н ц ы

п ы е» к о н ц ы


Слайд 10 ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ

ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHIФрагменты ДНК «слона»Фрагменты ДНК «лягушки»рекДНКрекДНК

BamHI
Фрагменты ДНК «слона»
Фрагменты ДНК «лягушки»
рекДНК
рекДНК


Слайд 11 Лигирование липких концов ДНК-лигазой Т4

Лигирование липких концов ДНК-лигазой Т4

Слайд 12 Лигирование тупых концов ДНК-лигазой Т4

Лигирование тупых концов ДНК-лигазой Т4

Слайд 13 Расщепление молекул ДНК рестриктазой и соединение полученных фрагментов

Расщепление молекул ДНК рестриктазой и соединение полученных фрагментов ДНК-лигазой.

ДНК-лигазой.


Слайд 14 Объединение разных молекул ДНК само по себе бесполезно,

Объединение разных молекул ДНК само по себе бесполезно, если вновь образованные

если вновь образованные рекДНК не будут реплицироваться в клетке-хозяине

и экспрессироваться.

Для доставки чужеродных генов в клетки различных организмов применяют ВЕКТОРЫ.

Как полученные гибридные гены ввести в клетку и заставить там работать – производить белки?


Слайд 15 Клонирующие векторы
Vehicle – англ. , повозка , транспортное

Клонирующие векторыVehicle – англ. , повозка , транспортное средство

средство


Слайд 16 Вектор (в технологии рекДНК)
Это молекула ДНК, способная

Вектор (в технологии рекДНК)Это молекула ДНК, способная самостоятельно реплицироваться в клетках

самостоятельно реплицироваться в клетках различных организмов и обеспечивать клонирование

(размножение) и экспрессию встроенного в нее искусственно какого-либо гена



Слайд 18 Плазмидные векторы

Плазмидные векторы

Слайд 19 ПЛАЗМИДЫ

ПЛАЗМИДЫ

Слайд 20 Плазмидный вектор pBR322 создатели - Боливар Ф., Родригес

Плазмидный вектор pBR322 создатели - Боливар Ф., Родригес Р.

Слайд 21 Технология рекомбинации ДНК с применением плазмидного вектора
клеток E.

Технология рекомбинации ДНК с применением плазмидного вектораклеток E. Coli или др. реципиентов

Coli или др. реципиентов


Слайд 22 ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗОВАВШИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ

ФРАГМЕНТЫ ОБРАЗОВАВШИЕСЯ ПРИ РАСЩЕПЛЕНИИ ДНК РАЗНЫХ ОРГАНИЗМОВ РЕСТРИКТАЗОЙ BamHIФрагменты ДНК плазмидыФрагменты донорной ДНК рекДНКрекДНК

BamHI
Фрагменты ДНК плазмиды
Фрагменты донорной ДНК
рекДНК
рекДНК


Слайд 23 Модификации плазмидных векторов
Для всех рутинных процедур молекулярного клонирования

Модификации плазмидных векторовДля всех рутинных процедур молекулярного клонирования широко используют E.coli

широко используют E.coli в качестве клетки-хозяина. Но часто могут

выступать и другие бактерии, например Bacillus subtilis. Клетки, способные воспринять чужеродную ДНК, называются компетентными.
Часто в векторы, которые функционируют в кишечной палочке, встраивают второй сайт ORIGIN, который инициирует их репликацию в других клетках (не в кишечной палочке). Эти так называемые ЧЕЛНОЧНЫЕ ВЕКТОРЫ позволяют сначала проводить внедрение рекДНК в клетки кишечной палочки, а затем в клетки других бактерий.
Созданы плазмидные вектора, которые содержат универсальный сайт origin для широкого спектра хозяев. Их можно использовать для работы с разными микроорганизмами.
 
С помощью плазмидных векторов можно клонировать фрагменты ДНК длиной до 10 т.п.н. Однако часто приходится работать с более крупными фрагментами.


Слайд 24 Векторы на основе бактериофага

Векторы на основе бактериофага

Слайд 25 Структура бактериофага λ Escherichia coli. Схема

Структура бактериофага λ Escherichia coli. Схема

Слайд 26 Бактериофаг λ Escherichia coli
«Портрет» электронномикроскопический

Бактериофаг λ Escherichia coli «Портрет» электронномикроскопический

Слайд 27 Инфицирование фагом λ клетки E.coli
После адсорбции фага на

Инфицирование фагом λ клетки E.coliПосле адсорбции фага на поверхности клетки белковый

поверхности клетки белковый отросток (чехол) сокращается, проталкивая стержень внутрь

клетки. Через стержень фаговая ДНК проникает внутрь клетки. Процесс облегчается благодаря местному повреждению клеточной стенки фаговым лизоцимом. Некоторые вирусы впрыскивают в клетку свою ДНК, другие проникают в нее сами.

  • Имя файла: tehnologiya-rekombinatsii-dnk.pptx
  • Количество просмотров: 147
  • Количество скачиваний: 0