Слайд 2
Генетический код
Характеристики:
Записывается в линейной форме, в качестве букв
выступают рибонуклеотиды РНК, последовательность которых комплементарна таковой нуклеотидов ДНК.
Последовательность
из трех рибонуклеотидных «букв» называется кодоном, кодирующим 1 аминокислоту, т.о. генетический код считывается триплетами.
Генетический код вырожденный, т.е. 18 из 20 аминокислот соответствует несколько триплетных кодонов.
Существуют старт и стоп-кодоны.
Код непрерывен, не используется «знаков препинания».
Код неперекрывающийся.
Код универсален.
Слайд 3
Генетический код
В 1961 г. Франсуа Жакоб, Жак Моно
предположили существование матричной РНК=РНК посредника.
Триплетность кода: Эксперименты Френсиса
Крика с мутациями сдвига рамки считывания у фага Т4. Вставка или делеция одного или двух нуклеотидов приводят к мутации, но не при вставке или делеции трех.
Работы по расшифровке кода:
Неклеточный синтез белков. (использование полинуклеотидфосфорилазы для синтеза искусственной РНК)
Использование гомополимеров (например, содержащих один тип рибонуклеотидов: ААААА…, GGGGG… и т.д.)
Использование смеси кополимеров (гетерополимеры РНК)
Метод связывания триплетов
Повторяющиеся кополимеры
Слайд 4
Генетический код
3. Использование смеси кополимеров
Слайд 5
Генетический код
Метод связывания триплетов
В 1964 г. Ниренберг и
Ледер разработали данный метод для установления точной последовательности кодонов.
Триплеты-кодоны иРНК комплементарны последовательностям тРНК , которые называются антикодонами.
Аминокислота метилась изотопом и прослеживалось какой из триплетов иРНК связывается с кодоном. Комплекс меченной тРНК и иРНК оставался на фильтре.
Слайд 6
Генетический код
5.Использование повторяющихся кополимеров
Гобинд Корана синтезировал протяженные молекулы
РНК с заданной последовательностью, многократно повторяющейся.
Из 2, 3-х,
и тетрануклеотидные повторы:
UGUGUGUG
UUGUUGUUGUUG
UACGUACGUACGUACG
Определяли теоретически ожидаемые пропрции аминокислот при добавлении таких иРНК в бесклеточную систему синтеза белков.
Слайд 7
Генетический код
Кодовый словарь
AUG старт кодон
UAA UAG UGA
стоп кодоны
Слайд 8
Генетический код
В 1966 г. Ф.Крик сформулировал гипотезу качания
(wobble hypothesis).
Предположил, что для комплементации с тРНК важны только
первых два рибонуклеотида, т.к. водородная связь в третьей позиции пары кодон-антикодон более свободная, чем между первыми двумя.
Это позволяет антикодону одного типа тРНК спариваться с несколькими триплетами иРНК.
Т.о. для кодирования аминокислот 61-м триплетом требуется около 30 различных тРНК.
Экономичность, без ущерба точности трансляции.
Слайд 9
Транскрипция
Синтез РНК на ДНК-матрице называется транскрипцией.
Транскрипция – начало
информационного потока в клетке
РНК посредник между ДНК и белком,
т.к.:
ДНК в ядре, но синтез белка в цитоплазме на рибосомах
РНК синтезируется в ядре, а затем мигрирует в цитоплазму
Общее количество РНК пропорционально количеству белка в клетке.
РНК-полимераза - фермент, участвующий в синтезе РНК на ДНК-матрице.
Использует в качестве субстрата рибонуклеозидтрифосфаты (NTP), не нуждается в праймерах.
Катализирует полимеризацию нуклеотидмонофосфатов (NMP) в полинуклеотидную цепь (NMP)n.
(NMP)n+NTP = (NMP)n+1 + PPi
Слайд 10
Транскрипция
Связывание РНК-полимеразы с матрицей происходит в сайтах –
промоторах.
Локализованы в 5` области, левее точки начала транскрипции.
Консенсусные последовательности:
у бактерий: ТАТААТ и ТTGAGA
После связываия с промотером РНК-поимераза катализирует инициацию транскрипции (встраивание первого 5`-рибонуклеозидтрифосфата, комплементарного старт-точке в ДНК)
Встраивание рибонуклеотидов и формирование полинуклеотидной цепи РНК-элонгация цепи.
Формирование временного гетеродуплекса ДНК/РНК
Терминация транскрипции
Слайд 11
Транскрипция у эукариот
Различия:
Участвуют три разные формы РНК-полимеразы, процесс
происходит в ядре.
Кроме промотеров находятся энхансеры, контролирующие процесс транскрипции.
Первычный
РНК-транскрипт созревает (процессинг): 5` конец добавляется кэп (шапочка)=7-метилгуанозин, а 3`конец добавляется хвост (поли-А-фрагмент).
Сплайсинг-вырезается часть последовательности РНК, остальные части сшиваются.
Слайд 12
Транскрипция у эукариот: инициация
3 формы РНК-полимеразы состоят
из: 2 больших субъединицы и 10-15 малых.
РНК-полимераза II
Эффективность начала
транскрипции определяется тремя цис-активирующими элементами эукариотического гена:
ТАТА-бокс= блок Голдберга-Хогнесса
С ААТ-бокс (GGCCAATCT)
Энхансеры-регулируют транскрипцию, локализуются на 5`, 3` концах и внутри гена.
Слайд 13
Транскрипция эукариот: процессинг
Шаг 1: первичная посттранскрипционная модификация: присоединение
к 5`- концу молекулы 7-метилгуанозина (кэп)
Шаг 2: формирование на
3`-конец РНК поли-А-последовательности (хвост)
Шаг 3: удаление интронов-инвертных последовательностей
Экзоны-последовательности, которые транскрибируются в зрелые РНК и с которых транслируются полипептиды.
Слайд 14
Транскрипция у эукариот: сплайсинг
В зависимости от специфичности механихма
сплайсинга, интроны подразделяются на группы:
Интроны, которые сами обладают ферментативной
активностью для вырезания
Интроны, которые сами не способны вырезаться.
Вырезаются с помощью сплайсосом.
Сплайсосома-комплекс из специфичных белков, акцептируемых концевыми последовательностями длинных интронов.
Основной компонент сплайсосом-мяРНП
Существует также альтернативный сплайсинг.
Слайд 15
Транскрипция у эукариот: эдитинг
Эдитинг-редактирование РНК
В процессе эдитинга последовательность
зрелой РНК отличается от последовательности, кодируемой экзонами ДНК.
2 типа
эдитинга:
Замещающий
Инсерционно-делеционный
Слайд 16
Трансляция
Трансляция мРНК- биополимеризация аминокислот в полипептидную цепь.
Структура тРНК:
Роберт Холли в 1965 г. Расшифровал последовательность тРНКala
Двумерная модель
тРНК в виде клеверного листа, трехмерная структура: на одном конце антикодоновая петля и антикодоновый стебель, а на другом-3`-акцепторный участоксвязывания аминокислоты.
Необходим фермент: аминоацил-тРНК-синтетаза.
1 этап: превращение аминокислоты в аминоациладениловую кислоту.
2 этап: молекула аминокислоты переносится на тРНК и связывается с адениновым остатком на 3~-конце тРНК.
Слайд 17
Трансляция
Стадии:
Инициация трансляции: образование комплекса+ инициирующий кодон: AUG+ последовательность
Шайна-Дельгарно
Образованный комплекс инициации ассоциирует с большой субъединицей, а факторы
инициации высвобождаются из комплекса
Элонгация: Р-сайт(пептидильный), А-сайт(аминоацильный).
Пептидилтрансфераза катализирует образование связи между аминокислотами
Е-сайт (выход)
Комплекс: мРНК-тРНК-аминокислота 2- аминокислота 1 проходит на 1 шаг в направлении Р-сайта (шаг равен 3 нуклеотидам).
После 1 сдвига в Р-сайте находится тРНК с растущей полипептидной цепью, а в А-сайте –тРНК с аминокислотой.
Терминация
Слайд 19
Трансляция у эукариот
Особенности инициации:
Наличие кэпа на 5`-конце
увеличивает эффективность трансляции
Кодон AUG в эукариотической мРНК граничит с
последовательностью Козак- 5`-ACCAUGG
Не требуется формилметионин
Рибосомы ассоциированы с мембраной, наличие ЭР увеличивает скорость транспортировки белков после синтеза
Слайд 20
Посттрансляционная модификация белков
Модификация N и C концов аминокислот
Модификация
отдельных аминокислотных остатков
Присоединение боковых цепей углеводородов-образование гликопротеинов
Укорочение полипептидных цепей
Удаление
сигнальных молекул
Связывание полипептидных цепей с металлами
