FindSlide.org - это сайт презентаций, докладов, шаблонов в формате PowerPoint.
Email: Нажмите что бы посмотреть
Белок – это последовательность аминокислот, связанных друг с другом пептидными связями.
Если количество аминокислот не превышает 10, то новое соединение называется пептид;
если от 10 до 40 аминокислот – полипептид,
если более 40 аминокислот – белок.
Линейная молекула белка, образующаяся при соединении аминокислот в цепь, является первичной структурой.
Последовательность и соотношение аминокислот в первичной структуре определяет дальнейшее поведение молекулы: ее способность изгибаться, сворачиваться, формировать те или иные связи внутри себя. Формы молекулы, создаваемые при свертывании, последовательно могут принимать
вторичный, третичный и четвертичный уровень организации.
П Е Р В И Ч Н А Я С Т Р У К Т У Р А
Это последовательность аминокислот в полипептидной цепи. Учитывая, что в синтезе белков принимает участие 20 аминокислот можно сказать о невообразимом количестве возможных белков.
Первичная структура белков задается последовательностью нуклеотидов в ДНК. Выпадение, вставка, замена нуклеотида приводит к изменению аминокислотного состава и, следовательно, структуры синтезируемого белка.
Если изменение последовательности аминокислот носит не летальный характер, а приспособительный или хотя бы нейтральный, то такой белок может передаться по наследству и остаться в популяции. В результате возникают новые белки и новые качества организма. Такое явление называется полиморфизм белков.
Последовательность и соотношение аминокислот в первичной структуре определяет формирование вторичной, третичной и четвертичной структур.
В Т О Р И Ч Н А Я С Т Р У К Т У Р А
Вторичная структура – это способ укладки полипептидной цепи в упорядоченную структуру, при которой аминокислоты взаимодействуют через пептидные группы. Формирование вторичной структуры вызвано стремлением пептида принять конформацию с наибольшим количеством водородных связей между пептидными группами. Вторичная структура определяется:
устойчивостью пептидной связи,
подвижностью С-С связи,
размером аминокислотного радикала.
Все это вкупе с аминокислотной последовательностью приводит к строго определенной конфигурации белка.
Можно выделить два возможных варианта вторичной структуры: α-спираль и β-структура (β-складчатый слой). В одном белке, как правило, присутствуют обе структуры.
В глобулярных белках преобладает α-спираль, в фибриллярных – β-структура.
Вторичная структура образуется только при участии водородных связей между пептидными группами:
атом кислорода одной группы реагирует с атомом водорода второй, одновременно кислород второй пептидной группы связывается с водородом третьей и т.д.
α -СПИРАЛЬ
Правозакрученная спираль, образуется при помощи водородных связей между пептидными группами 1-го и 4-го, 4-го и 7-го, 7-го и 10-го и так далее аминокислотных остатков.
Формированию спирали препятствуют пролин и гидроксипролин, которые обуславливают “перелом” цепи, ее резкий изгиб.
Высота витка составляет 0,54 нм и соответствует 3,6 аминокислотных остатков, 5 полных витков соответствуют 18 аминокислотам и занимают 2,7 нм.
β -СКЛАДЧАТЫЙ СЛОЙ
В этом способе укладки белковая молекула лежит "змейкой", удаленные отрезки цепи оказываются поблизости друг от друга. В результате пептидные группы ранее удаленных аминокислот белковой цепи способны взаимодействовать при помощи водородных связей.
β-Структура аминокислот взаимодействуют с отдаленными пептидными группами этой же белковой цепи при помощи водородных связей между пептидными группами.
Т Р Е Т И Ч Н А Я С Т Р У К Т У Р А
Третичная структура – это укладка полипептидной цепи в глобулу ("клубок"). Четкой границы между вторичной и третичной структурами провести нельзя, однако в основе третичной структуры лежат стерические взаимосвязи между аминокислотами, отстоящими далеко друг от друга в цепи. Благодаря третичной структуре происходит еще более компактное формирование цепи.
Наряду с α-спиралью и β-структурой в третичной структуре обнаруживается так называемая неупорядоченная конформация, которая может занимать значительную часть молекулы. В разных белках наблюдается разное соотношение типов структур. Например, инсулин содержит 52% α-спирали и 6% β-структуры, трипсин – 14% α-спирали и 45% β-структуры.
Аминокислоты принимают участие в формировании третичной структуры, образуя связи между своими функциональными группами (радикалами):
водородные – между ОН-, СООН-, NH2-группами радикалов аминокислот,
дисульфидные – между остатками цистеина,
гидрофобные – между остатками алифатических и ароматических аминокислот,
ионные – между СООН-группами глутамата и аспартата и NH2-группами лизина и аргинина,
псевдопептидные – между дополнительными СООН-группами глутамата и аспартата и дополнительными NH2-группами лизина и аргинина.
Ч Е Т В Е Р Т И Ч Н А Я С Т Р У К Т У Р А
Если белки состоят из двух и более полипептидных цепей, связанных между собой нековалентными (не пептидными и не дисульфидными) связями, то говорят, что они обладают четвертичной структурой. Такие агрегаты стабилизируются водородными связями, ионными и электростатическими взаимодействиями между остатками аминокислот, находящихся на поверхности глобулы.
Подобные белки называются олигомерами, а их индивидуальные цепи – протомерами (мономерами, субъединицами). Если белки содержат 2 протомера, то они называются димерами, если 4, то тетрамерами и т.д.
Лактатдегидрогеназа – фермент, принимающий активное
участие в окислении глюкозы при мышечном сокращении, также включает 4 субъединицы – Н (heart) и М (muscle) в разных сочетаниях: Н4, Н3М1, Н2М2, Н1М3, М4. Всего 5 изоферментов.
Креатинкиназа – фермент, участвующий в регенерации АТФ при мышечном сокращении, состоит из 2 субъединиц – В (brain) и М (muscle) в разных сочетаниях: ВВ, ВМ, ММ. Всего 3 изофермента.
Взаимодействие протомеров друг с другом осуществляется по принципу комплементарности, т.е. их поверхность подходит друг другу по геометрической форме и по функциональным группам аминокислот (возникновение ионных и водородных связей).
Так как субъединицы в олигомерах очень тесно взаимодействуют между собой, то любое изменение конформации какой-либо одной субъединицы обязательно влечет за собой изменение других субъединиц. Этот эффект называется кооперативное взаимодействие.
Например, у гемоглобина такое взаимодействие субъединиц в легких ускоряет в 300 раз присоединение кислорода к гемоглобину. В тканях отдача кислорода также ускоряется в 300 раз.
Присоединение в легких первой молекулы кислорода к одной из субъединиц гемоглобина изменяет ее конформацию. В результате она начинает влиять на следущую убъединицу, облегчая присоединение к ней кислорода. После этого они вдвоем влияют на третью субъединицу и так далее. В тканях первая молекула кислорода отделяется от своей субъединицы не очень легко, вторая уже быстрее и так далее.
К свойствам белков относят амфотерность, растворимость, способность к денатурации, коллоидные свойства.
А М Ф О Т Е Р Н О С Т Ь
Так как белки содержат кислые и основные аминокислоты, то в их составе всегда имеются свободные кислые (СОО–) и основные (NH3 +) группы.
Заряд белка зависит от соотношения количества кислых и основных аминокислот. Поэтому, аналогично аминокислотам, белки заряжаются положительно при уменьшении рН, и отрицательно при его величении. Если рН раствора соответствует изоэлектрической точке белка, то заряд белка равен 0.
Если в пептиде или белке преобладают кислые аминокислоты (глутамат и аспартат), то при нейтральных рН заряд белка отрицательный и изоэлектрическая точка находится в кислой среде. Для большинства природных белков изоэлектрическая точка находится в диапазоне рН 4,8-5,4, что свидетельствует о преобладании в их составе глутами
новой и аспарагиновой аминокислот
Если в белке преобладают основные аминокислоты (лизин и аргинин) – при нейтральных рН заряд обусловлен этими, положительно заряженными, аминокислотами.
Амфотерность имеет значение для выполнения белками некоторых функций, например, их буферные свойства,
т.е. способность поддерживать неизменным рН крови, основаны на способности присоединять ионы Н+ при закислении среды или отдавать их при защелачивании.
С практической стороны наличие амфотерности позволяет разделять белки по заряду (электрофорез) или использовать изменение величины рН
раствора для осаждения какого-либо известного белка.
Влияние рН на заряд белка
При смещении рН в растворе изменяется концентрация ионов Н+. При закислении среды (при снижении рН) ниже изоэлектрической точки ионы Н+ присоединяются к отрицательно заряженным группам глутаминовой и аспарагиновой кислот и нейтрализуют их. Заряд белка становится положительным.
При увеличении рН в растворе выше изоэлектрической точки концентрация ионов Н+ снижается и положительно заряженные группы белка (NH3 +-группы лизина и аргинина) теряют протоны, их заряд исчезает. Суммарный заряд белка становится отрицательным.
Р А С Т В О Р И М О С Т Ь
Так как большинство белков несет много заряженных
групп, то в целом они водорастворимы. Растворимость объясняется:
наличием заряда и взаимоотталкиванием заряженных молекул белка,
наличием гидратной оболочки – чем больше полярных и/или заряженных аминокислот в белке, тем больше гидратная оболочка (100 г белка альбумина связывает 30-50 г воды).
М Е Т О Д Ы О С А Ж Д Е Н И Я Б Е Л К О В
Д Е Н А Т У Р А Ц И Я
Денатурация – необратимое осаждение белка из-за разрыва связей, стабилизирующих четвертичную, третичную, вторичную структуры белка, сопровождаемое изменением растворимости, вязкости, химической активности, снижением или полной потерей биологической функции.
Физическая денатурация – повышение температуры, ультрафиолетовое и микроволновое излучение, механические воздействия, ионизация заряженными частицами.
2. Химическая денатурация:
кислоты и щелочи образуют водородные связи с пептидными группами,
органические растворители образуют водородные связи и вызывают дегидратацию,
алкалоиды образуют связи с полярными группами и разрывают систему водородных
и ионных связей,
тяжелые металлы взаимодействуют с заряженными радикалами, нейтрализуют отри цательные заряды и разрывают систему водородных и ионных связей.
О Б Р А Т И М О Е О С А Ж Д Е Н И Е
Обратимость осаждения белков обусловлена сохранением первичной структуры белка.
Восстановление физико-химических и биологических свойств белка называется ренативация (ренатурация). Иногда для ренативации достаточно просто удалить денатурирующий объект.
Высаливание
Высаливание – это добавление растворов нейтральных солей (Na2SO4, (NH4)2SO4). Анионы (SO4 2–) и катионы (Na+, NH4 +) взаимодействуют с зарядами белка (группы NH4 + и COO–). В результате заряд исчезает, и соответственно, исчезает взаимоотталкивание молекул. Одновременно резко уменьшается гидратная оболочка. Это ведет к "слипанию" молекул и осаждению.
Так как белки плазмы крови отличаются по размерам, заряду, строению, то можно подобрать такие количества соли, которые вызовут осаждение менее устойчивых белков, пока другие еще будут растворены. Например, подобным образом раньше определяли соотношение альбумины/глобулины
Осаждение водоотнимающими средствами
При добавлении водоотнимающих средств (ацетон, этанол) происходит отнятие у белка гидратной оболочки, но не заряда. Растворимость несколько снижается, но денатурации не наступает. Например, антисептическое действие этанола.
Изменение рН
Мягкое изменение рН до изоэлектрической точки белка ведет к исчезновению заряда, уменьшению гидратной оболочки и снижению растворимости молекулы.
С В О Й С Т В А Б Е Л К О В Ы Х Р А С Т В О Р О В
Свойства белковых растворов определяются большими размерами молекул, т.е. белки являются коллоидными частицами и образуют коллоидные растворы. К свойствам коллоидных растворов относятся:
Рассеивание луча света, проходящего через белковый раствор, и образование светящегося конуса – эффект Тиндаля.
2. Малая скорость диффузии.
3. Неспособность белковых частиц проникать через полунепроницаемые мембраны (целлофан), т.к. их поры меньше диаметра белков. Это используется в диализе – очистка белковых препаратов от посторонних примесей и лежит в основе работы "искусственной почки" для лечения острой почечной недостаточности.
4. Создание онкотического давления, то есть перемещение воды в сторону более высокой концентрации белка, что проявляется, например, как формирование отеков при повышении проницаемости сосудистой стенки.
5. Высокая вязкость в результате сил сцепления между крупными молекулами, что проявляется, например, при образовании гелей и студней.
1. По форме молекулы
Глобулярные – соотношение продольной и поперечной осей составляет <10 и в большинстве случаев не более 3-4. Они характеризуются компактной укладкой полипептидных цепей. Например: инсулин, альбумин, глобулины плазмы крови.
Фибриллярные – соотношение осей >10. Они состоят из пучков полипептидных цепей, спиралью навитых друг на друга и связанные между собой поперечными ковалентными и водородными связями. Выполняют защитную и структурную функции. Например: кератин, миозин, коллаген.
2. По количеству белковых цепей в одной молекуле
мономерные – имеют одну субъединицу (прото-
мер), например альбумин, миоглобин.
полимерные – имеют несколько субъединиц. На-
пример, гемоглобин (4 субъединицы), лактатде-
гидрогеназа (4 субъединицы), креатинкиназа(2 субъединицы),
3. По химическому составу
Простые – содержат в составе только аминокислоты (альбумины, глобулины, гистоны, протамины).
Сложные – кроме аминокислот имеются небелковые компоненты (нуклеопротеины,
фосфопротеины, металлопротеины, липопротеины, хромопротеины, гликопротеины).
АЛЬБУМИНЫ
Группа белков плазмы крови с молекулярной массой около 40 кДа, имеют кислые
свойства и отрицательный заряд при физиологических рН, т.к. содержат много глутаминовой кислоты. Легко адсорбируют полярные и неполярные молекулы, являются в крови переносчиком многих веществ, в первую очередь билирубина и жирных кислот.
ГЛОБУЛИНЫ
Группа разнообразных белков плазмы крови с молекулярной массой до 100 кДа, слабо-кислые или нейтральные. Они слабо гидратированы, по сравнению с альбуминами меньше устойчивы в растворе и легче осаждаются, что используется в клинической диагностике в „осадочных" пробах (тимоловая, Вельтмана). Часто содержат углеводные компоненты.
При обычном электрофорезе разделяются, как минимум, на 4 фракции – α1, α2, β и γ.
Так как глобулины включают в себя разнообразные белки, то их функции многочисленны. Часть α-глобулинов обладает антипротеазной активностью, что защищает белки крови от преждевременного разрушения, например, α1-антитрипсин, α1-антихимотрипсин, α2-макроглобулин.
Некоторые глобулины способны к связыванию определенных веществ:
трансферрин (переносчик ионов железа), церулоплазмин (переносчик ионов меди),
гаптоглобин (переносчик гемоглобина),
гемопексин (переносчик тема).
γ-Глобулины являются антителами и обеспечивают иммунную защиту организма.
ГИСТОНЫ
Гистоны – внутриядерные белки массой около 24 кДа. Обладают выраженными основными свойствами, поэтому при физиологических значениях рН заряжены положительно и связываются с дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК). Существуют 5 типов гистонов – очень богатый лизином (29%) гистон Н1, другие гистоны Н2а, H2b, НЗ, Н4 богаты лизином и аргинином (в сумме до 25%). Радикалы аминокислот в составе гистонов могут быть метилированы, ацетилированы или фосфорилированы. Это изменяет суммарный заряд и другие свойства белков.
Можно выделить две функции гистонов:
1. Регулируют активность генома, а именно препятствуют транскрипции.
2. Структурная – стабилизируют
пространственную структуру ДНК.
Гистоны образуют нуклеосомы
– октаэдрические структуры, состав ленные из гистонов Н2а, H2b, НЗ, Н4. Нуклеосомы соединяются между собой через гистон H1.
Благодаря такой структуре достигается уменьшение размеров ДНК в 7 раз.
Далее нить ДНК с нуклеосомами складывается в суперспираль и более сложные структуры. Таким образом, гистоны участвуют в плотной упаковке ДНК при формировании хромосом.
Благодаря гистонам в конечном итоге размеры ДНК уменьшаются в тысячи раз: длина ДНК достигает 6-9 см (10–1), а размеры хромосом – всего несколько микрометров (10–6).
ПРОТАМИНЫ
Это белки массой от 4 кДа до 12 кДа, у ряда организмов (рыбы) они являются замени-
телями гистонов, есть в спермиях. Отличаются резко увеличенным содержанием аргинина
(до 80%). Протамины присутствуют в клетках, не способных к делению. Их функция как у гистонов –структурная.
КОЛЛАГЕН
Фибриллярный белок с уникальной структурой. Обычно содержит моносахаридные (галактоза) и дисахаридные (галактоза-глюкоза) остатки, соединенные с ОН-группами некоторых остатков гидроксилизина. Составляет основу межклеточного вещества соединительной ткани сухожилий, кости, хряща, кожи, но имеется, конечно, и в других тканях.
Полипептидная цепь коллагена включает 1000 аминокислот и состоит из повторяющегося триплета [Гли-А-В], где А и В – любые, кроме глицина, аминокислоты. В основном это аланин, его доля составляет 11%, доля пролина и гидроксипролина – 21%. Таким образом, на другие аминокислоты приходится всего 33%. Структура пролина и гидроксипролина не позволяет образовать α-спиральную структуру, из-за этого образуется левозакрученная спираль, где на один виток приходится 3 аминокислотных остатка.
Молекула коллагена построена из 3 полипептидных цепей, сплетенных между собой в плотный жгут – тропоколлаген (длина 300 нм, диаметр 1,6 нм). Полипептидные цепи прочно связаны между собой через ε-аминогруппы остатков лизина. Тропоколлаген формирует крупные коллагеновые фибриллы диаметром 10-300 нм. Поперечная исчерченность фибриллы обусловлена смещением молекул тропоколлагена друг относительно друга на 1/4 их длины.
В коже фибриллы образуют нерегулярно сплетенную и очень густую сеть – выделанная кожа представляет собой почти чистый коллаген.
ЭЛАСТИН
По строению в общих чертах эластин схож с коллаге-
ном.
Находится в связках, эластичном слое сосудов.
Структурной единицей является тропоэластин с молекулярной массой 72 кДа и длиной 800 аминокислотных остатков.
В нем гораздо больше лизина, валина, аланина и меньше гидроксипролина. Отсутствие пролина обуславливает наличие спиральных эластичных участков.
Характерной особенностью эластина является наличие своеобразной структуры – десмозина, который своими 4-мя группами объединяет белковые цепи в системы, способные растягиваться во всех направлениях.
α-Аминогруппы и α-карбоксильные группы десмозина включаются в образование пептидных связей одного или нескольких белков.
