План
1) окрашивание Суданом III
2) Посуда и оборудование
3)
Реактивы
4) Ход определение
5)Клиническое значение
6) Методы окрашивание
7) нормальные величины
Судан iii
Судан III
Судан — группа нейтральных жирорастворимых красителей. Общая
формула: C22H16N2O
Существует несколько типов с разными заместителями: Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV.
Слайд 4
Окрашивание суданом III
(О.В.Волкова, Ю.К.Елецкий, 1982). Является наиболее распространенным методом выявления
жира.
Липиды локализуются в цитоплазме клеток главным образом в мембранах
органелл и обнаруживаются преимущественно в нейтрофильных гранулоцитах. Играют важную роль в проницаемости мембран. Цитохимическое исследование липидов основано на применении красящих веществ, растворяющихся в жирах (судан III, судан IV, черный судан и др.). Для выявления нейтрального жира пользуются суданом III, окрашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды выявляются лучше суданом черным (черное окрашивание).
Слайд 5
2) Посуда и оборудование
химические стаканы или кюветы
мерные цилиндры
пипетки
воронки
горелка
Слайд 6
3) реактивы
Формалиновый спирт (1 часть формалина и 4
части 96% спирта)
70% этиловый спирт (к 100 мл 96
% спирта прибавить 39,18 мл дистиллированной воды)
Альфа-нафтол
Раствор судана (к 100 мл 70 % спирта добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1,2 г альфа-нафтола и в избытке судан III. Раствор кипятят в течение 10 мин и фильтруют)
Краситель Романовского-Гимзы
Слайд 7
4) Ход определение
Приготовление раствора красителя. В 100
мл горячего 70% спирта засыпают 0,2-0,3 г порошка судана
III, несколько раз взбалтывают и ставят в термостат (при 58°С) на несколько часов, затем охлаждают и фильтруют.
Слайд 8
ход окраски
1.Замороженные срезы (из свежей или фиксированной в
формалине ткани) на несколько минут переносят из воды в
50% спирт.
2. Помещают в спиртовой раствор красителя на 15-30 мин (при применении щелочного раствора судана III - на 5 минут).
3. Быстро ополаскивают в 50% спирте.
Слайд 9
4. Промывают в дистиллированной воде.
5. Подкрашивают ядра кислым
гемалауном или гематоксилином Эрлиха.
6. Промывают и заключают в желатин
или глицерин-желатин
Слайд 10
После окраски
Результат: жировые вещества интенсивно оранжево-красного цвета, ядра -
синие.
Окраску срезов раствором Судана III следует проводить в бюксе с
закрытой крышкой. В противном случае спирт испаряется, и из насыщенного раствора судан III выпадает в виде осадка, который остается в препарате.
Слайд 11
Методы:
Тотальный препарат: окраска судан III – гематоксилином
Срез после
декальцинации; окраска по Шморлю
Срез; окраска по Маллори
Слайд 12
Тотальный препарат: окраска судан III - гематоксилином
Препарат
- белая жировая ткань.
Тотальный препарат сальника. Окраска судан III
-гематоксилином.
1. Препарат является тотальным.
б) Это означает, что перед нами - не срез органа, а участок сальника, растянутого на предметном стекле.
2. Жировые клетки на препарате заполнены крупными каплями жира (1), которые окрашены суданом Ш в ярко-оранжевый цвет.
Слайд 13
Срез после декальцинации; окраска по Шморлю
Препарат - пластинчатая
костная ткань. Поперечный срез трубчатой кости. Окраска по методу Шморля.
1. Применённый
метод окраски позволяет выявить
стенки костных полостей (1) и канальцев (2), окрашивающиеся в тёмно-коричневый цвет благодаря высокому содержанию здесь коллагенновых волокон.
2. В костных полостях находятся тела костных клеток (остеоцитов), а в канальцах - отростки этих клеток.
Слайд 14
Срез; окраска по Маллори
4. Препарат - срез яичника
кролика. Окраска по методу Маллори.
1. В методе Маллори используются 3 красителя
(п. 11.3.3), что делает картину многоцветной.
2. На снимке - женская половая клетка (ооцит), находящаяся в фолликуле яичника.
3. Цитоплазма (1) клетки окрашена в розовый,
окружающая её блестящая оболочка (2) - в голубой,
а ядра фолликулярных клеток (3) - в фиолетовый цвет.
Слайд 15
Клинические значение
Повышение содержания липидов в нейтрофилах наблюдается
при острых лейкозах и обострении хронических лейкозов.
При острых
лейкозах липиды в бластных клетках обнаружены у больных при миелобластном и монобластном вариантах и не выявлены при лимфобластном остром лейкозе.
При недифференцированном остром лейкозе бластные клетки лишь в небольшом количестве (1,38 - 3,02%) содержат липиды.
Слайд 16
Вывод:
В мазках периферической крови липиды содержатся в цитоплазме
нейтрофилов в виде обильной зернистости. Большинство нейтрофилов (69 -
80%) у здоровых людей красятся интенсивно (+++), 18-36% дают окраску средней интенсивности (++) и 10% слабо окрашены (+). Средний цитохимический коэффициент (СЦК) липидов в нейтрофилах 2,617 - 2,683.