Презентация на тему Серелогические реакции

антителами in vitro .

Цели применения:
серодиагностика бактериальных и вирусных

инфекционных заболеваний;
сероидентификация выделенных культур различных микроорганизмов (определение родовой, видовой и типовой принадлежности микроорганизма или его антигенов с известными иммунными сыворотками);
идентификация видовой принадлежности белков (выявление фальсификации мясных и рыбных изделий).

физического состояния антигена

Прямые серологические реакции, основанные на прямом взаимодействии

антигена с антителом (агглютинация, преципитация).
Опосредованные реакции – реакции со свидетелями (реакция непрямой гемагглютинации, реакция связывания комплемента).
Реакции с использованием меток (ферментных, флюоресцирующих и т.д.) для антигена или антитела (иммуноферментный анализ, реакция иммунофлюоресценции, радиоиммунный анализ).

(наименьшее количество антител), при котором данная серологическая реакция будет

положительной.
Специфичность серологической реакции – способность антигена реагировать только с гомологичным антителом.
Чувствительность серологической реакции - минимальное количество антигенов или антител, которое можно выявить с помощью данной реакции.

анализ
Иммуноферментный метод (ИФА)

и выпадение в осадок корпускулярных антигенов: бактерий, эритроцитов, а

также латексных частиц с адсорбированными на них антигенами под влиянием антител в среде с электролитом.

вариантах: с известными антигеном для обнаружения антител или с

известными антителами для выявления антигена. Для постановки РНГА используют эритроцитарные диагностикумы, приготовленные путем адсорбции на эритроцитах антигенов или антител в зависимости от цели исследования.

тонкой пленки из склеивающихся эритроцитов (зонтик).

в присутствии электролитов (NaCl) образуется комплекс Аг-Ат в виде

нерастворимого преципитата.

РП применяют в двух целях: выявление антигенов с помощью известной иммунной преципитирующей сыворотки или антител с использованием известных антигенов.
Используется как качественный, так и количественный анализ (реакция Манчини).
Очень чувствительная реакция для определения антигенов.
С помощью РП определяют фальсификацию рыбных и мясных изделий.

реакции флокуляции , кольцепреципитации.
в плотной среде (в

агаре, полиакриламидном геле) - реакция преципитации по Оухтерлони , радиальная иммунодиффузия по Манчини , реакция иммуноэлектрофореза.

+
Реакцию проводят путем наслаивания на иммунную

сыворотку антигена

чашках Петри .
В разные лунки в агаре вносится взвесь,

содержащая антиген и иммунная сыворотка.
Из лунок антиген и антитела диффундируют в питательную среду, вступают в иммунную реакцию и образуют полосы преципитации.

Реакция преципитации в геле по Оухтерлони

и иммунной сывороткой (антителами) в лунке A.

структуры микроорганизмов.

Принцип и последовательность проведения реакции
Антигенный комплекс помещают в

лунку, которая находится в центре геля, залитого на стеклянную пластинку.
Через гель пропускают электрический ток, в результате происходит перемещение антигенов на неодинаковые расстояния соответственно своей электрофоретической подвижности.
В канавку вносят специфическую иммунную сыворотку.
Антигены и антитела диффундируют в геле навстречу друг другу. В месте их соприкосновения образуются линии преципитации .

и образование полос преципитации

– это серологическая реакция , в которой для визуализации

образовавшегося комплекса антиген-антитело используются ферменты-метки (пероксидаза хрена или щелочная фосфатаза). Эти маркерные (индикаторные) ферменты способны расщеплять субстрат и вызывать изменение цвета среды.

антигенов бактерий и вирусов со специфическими антителами, меченными флюоресцирующими

красителями. Образовавшиеся комплексы АГ-АТ становятся хорошо видимыми под люминесцентным микроскопом.
Преимущества РИФ:
простота,
высокая чувствительность,
скорость получения результата.

меченым флуоресцентным красителем антителом.
Непрямой метод (РНИФ) – 1)

образование комплекса антиген-антитело, 2) выявлении этого комплекса путем обработки его меченым флуоресцентным красителем антигаммаглобулином (АТ к АТ).

Непрямой метод

Прямой метод

с комплексом АГ + АТ . Реакция протекает в

две фазы. Первая фаза ­- взаимодействие антигена и антитела. К исследуемой сыворотке, содержащей антитела, добавляют известный антиген и стандартный комплемент, инкубируют при 37 ° С в течение одного часа. Вторая фаза - выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка кролика, содержащая гемолитические антитела к эритроцитам барана). К смеси антиген + антитело + комплемент добавляют индикаторную систему и вновь инкубируют при 37° С в течение 30 - 60 мин. Если комплемент адсорбировался ранее на комплексе АГ + АТ (в исследуемой сыворотке специфические антитела присутствовали) , то гемолиза эритроцитов не происходит.
При отсутствии же в исследуемой сыворотке специфических антител, комплекс АГ + АТ не образуется и комплемент остается несвязанным. При добавлении гемолитической системы комплемент присоединяется к ней и происходит гемолиз эритроцитов.

гемолитических антител взвесь эритроцитов превращается в «лаковую кровь» вследствие

выхода гемоглобина. Реакция гемолиза используется в РСК как индикаторная: для тестирования присутствия или отсутствия свободного комплемента.