Слайд 2
Наследственная галактоземия
Галактоземия тип I
(недостаточность
галактозо-1-фосфат уридилтрансферазы)
Галактоземия тип II
(недостаточность
галактокиназы)
Галактоземия тип III
(недостаточность
УДФ-галактозо-4 эпимеразы)
Слайд 3
Галактоземия 1 типа
Манифестирует в неонатальном периоде. Через несколько
дней после первого приема молока появляется рвота, диаррея. В
течение первых недель нарастает желтуха, гепатоспленомегалия. Гипотрофия до кахексии. Выявляется катаракта, нарастает задержка психомоторного развития.
Слайд 4
НАСЛЕДСТВЕННАЯ ГАЛАКТОЗЕМИЯ ТИП I
Галактоземия I типа –
наследственное заболевание, обусловленное недостаточностью галактозо-1-фосфат уридил трансферазы, фермента, участвующего
в метаболизме галактозы.
Галактоземия тип I является тяжелой, требующей неотложной коррекции патологией. Массовый скрининг новорожденных, проводимый во многих странах, направлен на выявление именно этой формы галактоземии.
Слайд 5
ДИАГНОСТИКА ГАЛАКТОЗЕМИИ ТИП I
1. определение
концентрации галактозы, галактозо-
фосфата в
крови
2. измерение уровня активности фермента галактозо-1-
фосфат уридилтрансферазы в эритроцитах.
3. ДНК-анализ . На сегодняшний день в гене галактозо-1
фосфат уридилтрансферазы (GALT) описано более 180
различных мутаций. Наиболее распространенными
являются мутации Q188R и К285N, в совокупности, они
составляют в европейских популяциях более 70% от всех
мутантных аллелей и обуславливают развитие
классической формы галактоземии.
Слайд 6
РЕЗУЛЬТАТЫ МУТАЦИОННОГО АНАЛИЗА ПАЦИЕНТОВ С ГАЛАКТОЗЕМИЕЙ ТИП I,
ПОЛУЧЕННЫЕ В ЛАБОРАТОРИИ НБО МГНЦ РАМН
23 пациента с галактоземией
тип I
Скрининг на частые мутации Q188R и K285N
Поиск редких аллелей: обнаружено 8 мутаций (две из них – новые)
9 мутаций еще не обнаружены
Слайд 7
ДЕТЕКЦИЯ МУТАЦИИ Q188R
1. ПЦР экзонов 5-6 гена
GALT –
фрагмент размером 477 п.н.
2. Рестрикционный
анализ с
использованием фермента
рестрикции Bst2UI (CC^WGG)
3. При мутации Q188R исчезает сайт
рестрикции для Bst2U I и появляется
фрагмент размером 377 п.н.
4. На рисунке справа:
1 – Q188R в гетерозиготном
состоянии
2 – норма
3 - Q188R в гомозиготном состоянии
377п.н.
270 п.н.
107 п.н.
100 п.н.
1 2 3
Слайд 8
ДЕТЕКЦИЯ МУТАЦИИ К285N
1. ПЦР экзона 9 гена
GALT –
фрагмент размером 160 п.н.
2.
Рестрикционный анализ с
использованием фермента
рестрикции Sse9 I (^AATT)
3. При мутации K285N возникает сайт
рестрикции для Sse9 I и появляются
фрагменты размером 98 п.н. И 62 п.н.
4. На рисунке справа:
1– Норма
2 – K285N в гетерозиготном состоянии
160 п.н.
98 п.н.
62 п.н.
Слайд 9
НАСЛЕДСТВЕННАЯ ФРУКТОЗЕМИЯ (АЛЬДОЛАЗЫ В НЕДОСТАТОЧНОСТЬ)
Фруктоземия – наследственное заболевание
обмена веществ, обусловленное недостаточностью фермента – альдолазы В, участвующего
в процессе утилизации фруктозы. В результате недостаточности альдолазы В фруктозо-1-фосфат накапливается в организме, ингибируя процессы гликогенолиза и глюконеогенеза.
Слайд 10
Наследственная непереносимость фруктозы
Инфантильная форма- начало сразу после первого
приема пищи: гипогликемия, гипергидроз, тошнота, рвота, апатия, вялость, сонливость,
тремор, судороги, прогрессирует печеночная недостаточность, гепетомегалия, желтуха. Гибель на 1 году жизни.
Позднеинфантильная форма- манифестриует до 3 лет плаксивостью, гипервозбудимостью в сочетании с апатией, рвота, диарея,гептомегалия, желтуха, гипотрофия, миоклонии, прогрессирующая почечная недостаточность. При своевременном диагнозе и назначении диеты без фруктозы и сахарозы прогноз благоприятный.
Слайд 11
ДИАГНОСТИКА ФРУКТОЗЕМИИ
измерение активности альдолазы В в
биоптате печени.
снижение глюкозы в крови через час после
введения фруктозы в определенной дозе и определение фруктозы в моче и плазме методом ТСХ (подобный тест должен проходить под строгим врачебным контролем, что не всегда возможно в лабораторных условиях).
ДНК-анализ
Слайд 12
ДНК-АНАЛИЗ ФРУКТОЗЕМИИ
Ген ALDOB локализован на длинном плече
хромосомы 9 (локус 9q22.3)
Молекулярно-генетический анализ фруктоземии в мировой
практике был начат в конце 80-х годов прошлого столетия
На сегодняшний день известно около 20 различных мутаций в гене альдолазы В.
Описаны две частые мутации A149P и A174D в экзоне 5 гена ALDOB.
Мутация A149P широко распространена в Европе и чаще встречается среди жителей северной Европы. По некоторым оценкам частота встречаемости мутации A149P составляет около 60%
Частота встречаемости мутации A174D составляет в совокупности 16% в популяциях Италии, Швейцарии и Югославии
Слайд 13
Результат рестрикционного анализа ПЦР-фрагмента экзона 5 гена ALDOB
ферментом BstC8 I в норме и при частых мутациях
A149P, A174D.
A149 A174
A149P
A174
A174D
A149
70 121 9 135
191 9 135
70 121 144
НОРМА
МУТАЦИЯ A149P
МУТАЦИЯ A174D
Слайд 14
ДЕТЕКЦИЯ МУТАЦИЙ А149Р В СЕМЬЕ Т.
ПЦР экзона 5
гена ALDOB
Рестрикционный анализ с использованием фермента рестрикции BstC8 I
(GCN^NGC)
На рисунке справа:
1 –гетерозигота по мутации А149Р (отец)
2 –гомозигота по мутации А149Р (пробанд)
3 –гетерозигота по мутацииА149Р (мать)
4 – норма (контроль)
191 п.н.
135 п.н
121 п.н.
70 п.н.
1 2 3 4
Слайд 15
РЕЗУЛЬТАТЫ МУТАЦИОННОГО АНАЛИЗА ПАЦИЕНТОВ С ФРУКТОЗЕМИЕЙ, ПОЛУЧЕННЫЕ В
ЛАБОРАТОРИИ НБО МГНЦ РАМН
Слайд 16
Гликогенозы
Гликогенозы – заболевания, обусловленные наследственными дефектами ферментов, участвующих
в синтезе или расщеплении гликогена, а также в транспорте
глюкозы и ее производных. В результате происходит накопление гликогена в разных тканях, преимущественно в печени и мышцах
Слайд 17
Классификация гликогенозов
Гликогеноз 0 типа (недостаточность гликогенсинтетазы)
Гликогеноз I типа
(болезнь Гирке)
Гликогеноз II типа (болезнь Помпе)
Гликогеноз III типа (болезнь
Форбса)
Гликогеноз IV типа (болезнь Андерсена)
Гликогеноз V типа (болезнь МакАрдля)
Гликогеноз VI типа (болезнь Герса)
Гликогеноз VII типа (болезнь Таруи)
Гликогеноз IXa типа (недостаточность киназы фосфорилазы)
Гликогеноз IXb типа (дефект α-субъединицы киназы фосфорилазы)
Гликогеноз XI типа (синдром Фанкони-Бикеля)
Слайд 18
Дифференциально-диагностические маркеры
Ранняя гепатомегалия с дисфункцией печени
« кукольное лицо»
Лактат
ацидоз
Гипогликемия
При болезни Гирке-реккурентные инфекции, язвы в полости рта и
слизистой кишечника, нейтропения.
При болезни Помпе- кардиомегалия, прогрессирующая легочно-сердечная недостаточность, прогрессирующая мышечная слабость
Слайд 19
Лабораторная диагностика гликогенозов
ООбязательные исследования:
Оопределение концентрации глюкозы, лактата
и кетоновых тел натощак и после еды
ППровокационные пробы:
ввведение
глюкагона натощак и после еды
ББиохимическая диагностика:
иизмерение активности ферментов в печени, мышцах, эритроцитах, лейкоцитах, фибробластов
ДДНК-диагностика
Слайд 20
ДНК-диагностика гликогенозов в лаборатории НБО МГНЦ РАМН
* -
новая мутация