Слайд 2
Классификация возбудителя туберкулеза
Семейство Mycobacteriaceae
Род Mycobacterium
Вид M. tuberculosis (tuberculum
– бугорок)
М. bovis
M. leprae
M. cansassii
M. xenopi
M. ulcerans
*- патогенные виды
Слайд 3
Характеристика возбудителя туберкулеза
21 гр. по Берджи (гр+ палочки,
аэроб)
Неподвижны, спор, капсулы нет
В клеточной стенке большое количество липидов
(миколовая кислота и липоиды – до 40% от сухого веса), что определяет следующие свойства:
Кислотоустойчивость (5-10% кислоты)
Уст-ть к щелочам и спирту
Уст-ть к высушиванию, УФ, дез. Средствам
Вызывают сенсибилизацию организма
Слайд 4
Главный фактор патогенности – токсический гликолипид – Корд-фактор
Располагается
на поверхности и в толще клеточной стенки
По химической природе
– полимер: 1 мол-ла дисахарида тригалозы+ миколовая жирная к-та+миколиновая жирная кислота
Его функции:
Токсическое действие на ткани
Защита от фагоцитоза
Подавляет миграцию лейкоцитов
Слайд 5
Микробиологическая диагностика
Бактериоскопический
Экспресс-диагностика (ПЦР, РИФ)
Бактериологический – основной
Биологический
Метод кожно-аллергических проб
Слайд 6
Бактериоскопический метод
Нередко материал содержит мало бактерий туберкулеза и
для повышения вероятности их обнаружения используют методы обогащения: центрифугирование
и флотацию. В первом случае исследуемый материал обрабатывают смесью растворов NaCl и NaOH (гомогенизация), центрифугируют и микроскопируют осадок. Второй метод включает обработку материала смесью NaOH, дистиллированной воды и ксилола (или бензола). Образец энергично встряхивают; образующаяся пена всплывает и захватывает микобактерии. Пену отсасывают и готовят мазки.
Окраска по Циль-Нильсену - туберкулезные микобактерии визуализируются как ярко-красные, тонкие, изящные, в одиночку или группами, большей частью лежащие вне клеток палочки.
Окраска аурамином – в люмин. микроскопе – M.tub. Золтисто-оранжевого цв, атипичные формы – зеленый.
Слайд 7
Микобактерии туберкулеза в препарате после окраски по Циль-Нильсену.
Слайд 8
Возбудители туберкулеза в мазке мокроты. На фоне слизи,
окрашено в синий цвет, тонкие рубиновые палочки туберкулезных бактерий.
Окраска по Цилю-Нильсону.
Слайд 9
Флуоресценция туберкулезных бактерий после окраски аурамином.
Слайд 10
Бактериологический метод
Для повышения эффективности выделения возбудителя туберкулеза и
уничтожения контаминирующей микрофлоры применяют методы обогащения или обрабатывают материал
6-12% серной кислотой. Основной недостаток бактериологического метода — длительность получения результата вследствие медленного роста микобактерий (от 2 до 12 нед). В связи с этим разработаны ускоренные микрометоды выделения возбудителя туберкулеза.
Слайд 11
Один из распространённых методов выделения возбудителя туберкулеза, метод
Прайса, заключается в следующем. Материал помещают на предметное стекло,
обрабатывают серной кислотой, отмывают физиологическим раствором и вносят в питательную среду, дополненную цитратной лизированной кровью.
Стекло вынимают через 3-4 сут и окрашивают но Цилю-Нильсену. При микроскопии обнаруживают микроколонии микобактерии возбудителя туберкулеза. Вирулентные бактерии образуют змеевидные, а невирулентные — аморфные микроколонии.
Слайд 13
Основные питательные среды
Среда Левенштейна – Йенсена (аспарагин –
источник азота, яйца, картофельная мука, глицерин, малахитовая зелень) –
на фоне зеленоватого цвета среды бородавчатые желтого цвета колонии в R-форме, шероховатые, с неровными краями.
Слайд 14
Среда Финна – глютамат натрия (источник азота) +малахитовая
зелень
Среда Новая – гликокол (источник азота) + малахитовая зелень.
Колонии мелкие, морщинистые (манная крупа), шероховатые (R-форма). Петлей снимается вся колония.
Среда Сотона – жидкая. Солевой р-р (цитрат железа + фосфат калия) + аспарагин + глицерин. Рост: поверхностная пленка со специфическим запахом.
Слайд 15
Идентификация
Проба на каталазную активность – чистую культуру возбудителя
прогревают 30 мин. при Т=68оС и проводят тест (у
патогенного возбудителя фермент каталаза термолаби-лен, а у атипичных видов - термостабилен)
Ниациновый тест (проба Конно) – M.tub. Синтезирует никотин в среду Сотона. При добавлении цианистого калия к среде образуется ниацин, который при соединении с 5% хлорамином дает ярко-желтое окрашивание.
Слайд 16
Биологическая проба
Биологическая проба является по праву наиболее рациональным
диагностическим приемом. Материал может быть введен под кожу или
в полость живота морским свинкам. При наличии в материале вирулентных туберкулезных микобактерий обычно на 10-12-й день в месте его введения под кожей образуется уплотнение, переходящее в дальнейшем в незаживающую язву. Свинки погибают от генерализованного туберкулеза через два – четыре месяца.
Ускоренная биологическая проба: через регионарный лимфатический узел морской свинки вводят несколько капель наследуемого материала. На 8—10-й день увеличенный лимфатический узел вырезают и исследуют бактериоскопически в препаратах-отпечатках на присутствие туберкулезных микобактерий.
Слайд 17
Для выявления аллергии применяют внутрикожную пробу Манту. Для
постановки туберкулиновых проб выпускают готовые к употреблению ампулированные растворы
PPD (сухой очищенный туберкулин-глицериновый экстракт бульонной культуры микобактерии) с активностью 2 туберкулиновых единиц (2 ТЕ) в 0,1 мл. Внутрикожное введение туберкулинаДля выявления аллергии применяют внутрикожную пробу Манту. Для постановки туберкулиновых проб выпускают готовые к употреблению ампулированные растворы PPD (сухой очищенный туберкулин-глицериновый экстракт бульонной культуры микобактерии) с активностью 2 туберкулиновых единиц (2 ТЕ) в 0,1 мл. Внутрикожное введение туберкулина производят на наружной поверхности верхней трети правого плечаДля выявления аллергии применяют внутрикожную пробу Манту. Для постановки туберкулиновых проб выпускают готовые к употреблению ампулированные растворы PPD (сухой очищенный туберкулин-глицериновый экстракт бульонной культуры микобактерии) с активностью 2 туберкулиновых единиц (2 ТЕ) в 0,1 мл. Внутрикожное введение туберкулина производят на наружной поверхности верхней трети правого плеча (после предварительной обработки кожи 70% спиртом) специальным туберкулиновым или однограммовым шприцем строго внутрикожно. Вводят 0,1 мл PPD; при правильной технике проведения пробы в коже образуется белая папула размером 5—8 мм в диаметре. Проверка реакции при пробе Манту производится через 48—72 часа и считается положительной при наличии инфильтрата не менее 5 мм в диаметре. Гиперемия, окружающая инфильтрат, не учитывается.
Положительные и резко положительные реакции (более 16 мм) подтверждают наличие сенсибилизации организма, а отрицательная туберкулиновая реакция (менее 5 мм) может указывать на отсутствие заболевания или на излечение. В случае тяжелого заболевания отрицательная туберкулиновая реакция может свидетельствовать об истощении защитных сил организма.
Слайд 18
Классификация и характеристика возбудителя дифтерии
Род Corynebacterium (coryne –
булава, bacterium – палочка)
Вид C.diphtheriae (пленка, перепонка)
Тонкие гр+ палочки,
утолщенные на концах за счет зерен волютина
Неподвижна, спор не образует,
есть микрокапсула
Характерен полиморфизм
Имеются коринеформные бактерии,
не обладающие патогенностью-
дифтероиды
Слайд 19
Факторы патогенности
Адгезины – поверхностные структуры липидной и белковой
природы (корд-фактор, микрокапсула)
Ферменты – каталаза, нейраминидаза (усиливает действие токсических
белков) , гиалуронидаза (отек), гемолизин, фибринолизин – разрушает фибринозную плёнку Þ распространение очага. дермонекротоксин
Дифтерийный гистотоксин – основной фактор патогенности – блокирует синтез белка в клетках, наиболее снабженных кровью (миокард, периф. и ЦНС, почки и др.)
Агрессины – подавление фагоцитоза
Слайд 21
Окраска по Нейссеру. Для дифтерийной палочки хар-но наличие
полярно расположенных зерен волютина и положение в виде буквы
«V». Дифтероиды и псевдодифтерийная палочка не имеют зерен волютина или содержат их не на концах, а по длине палочки. Кроме того, сами бактерии располагаются в виде «частокола»
Слайд 22
Биовары
У этого возбудителя выделяют биотипы - gravis, mitis,
intermedius, отличающиеся по морфологии, антигенным и биохимическим свойствам, тяжести
заболеваний у человека. Тип gravis чаще вызывает вспышки и более тяжелое течение, для него характерны крупные с неровными краями и радиальной исчерченностью колонии в виде маргаритки (R- формы). Тип mitis вызывает преимущественно легкие спорадические заболевания, образует на плотных средах мелкие гладкие колонии с ровными краями (S- формы). Тип intermedius занимает промежуточное положение, образует на плотных средах переходные по характеристикам RS- формы, однако еще более мелкие. На жидких средах вызывают помутнение сред, образуют крошковидный осадок.
Слайд 23
Теллуритовая среда Клауберга (питательный агар с теллуритом натрия,
глицерином и дефибринированной кровью). На ней задерживается рост кокков
и другой микрофлоры зева, что способствует размножению бактерий дифтерии.
Слайд 24
Идентификация
Способность бактерий дифтерии продуцировать токсин устанавливают в реакции
преципитации в агаре. Для этого в чашку Петри с
питательным агаром, содержащим 15—20%.лошадиной сыворотки, 0,3% мальтозы и 0,03% цистина, кладут полоску фильтровальной бумаги (1,5 X 6 см), пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой, содержащей 5000 АЕ/мл. Чашку подсушивают при 37°С в течение 30 мин и засевают исследуемые культуры в виде перпендикулярных к бумаге штрихов на расстоянии 0,6—0,8 см от края бумаги. В качестве контроля используют заведомо токсигенную культуру. Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня. При размножении токсигенной культуры в месте соединения токсина с антитоксином в плотной питательной среде образуется преципитат в виде белых линий — «усов»
Слайд 25
Проба ПИЗУ
Для определения цистиназы в столбик питательного агара
с циститом уколом засевают исследуемую культуру. Посевы инкубируют при
37° С до следующего дня. Истинные дифтерийные палочки вызывают почернение среды по ходу посева (в результате образования сульфида свинца), вокруг которого появляется зона коричневого цвета, а на глубине 1 см от поверхности в среде образуется коричневое «облачко».