Презентация на тему Методы диагностики вирусных инфекций

мероприятий по борьбе с болезнями животных вирусной этиологии. Быстрый

и правильно поставленный диагноз обеспечивает успех в ликвидации вспышки болезни, так как позволяет четко выяснить эпизоотическую ситуацию и своевременно принять целенаправленные меры по оздоровлению поголовья животных с наименьшими потерями.
Для постановки диагноза требуется сбор, изучение, анализ и сопоставление целого комплекса различных данных.
На первом этапе диагностики используют данные, которые можно быстро собрать непосредственно в хозяйстве. К таковым относятся:
Эпизоотологические данные, включающие свои сведения об охвате болезнью данного поголовья животных, скорости и территориальном распространении болезни, видах заболевших животных, динамике выявления больных и т,д. ;
Клинические признаки болезни. Они включают определение (по сравнению с нормой) температуы тела, частоты и формы дыхания, частоты пульса, нарушение аппетита, поведение, состояния кожных покровов и слизистых оболочек, функционирования органов пищеварения, выделения т.д. ;
Патологоанатомические изменения, которые обычно устанавливают при вскрытии павших животных. Различают макроскопические изменения (по сравнению с нормой) формы, размера, цвета, консистенции, появление узелков, кровоизлияний, везикул и другие образования, не встречающиеся в норме, а также микроскопические изменения в клетках и тканях, обнаруживаемые гистологическими методами.

и подготовка к исследованию (для подавления сопутствующей бактериальной флоры

обрабатывают антибиотиками).
Заражение исследуемым материалом чувствительной модели. Вирусы в отличии от бактерий не растут на питательных средах, т.к. являются абсолютными (облигатными) паразитами, поэтому для их культивирования применяются особые модели:
в организме восприимчивых животных;
в куриных эмбрионах (овокультуры);
в культуре клеток.
Культивирование вируса в зараженной модели при стандартных условиях (оптимальная температура, продолжительность культивирования).
Индикация (обнаружение) вируса в зараженной модели.
Идентификация выделенного вируса в серологических реакциях.

необходимо прежде всего:
Не допустить загрязнения штаммов вирусов посторонней микрофлорой;
Обеспечить

безопасность работающего персонала от возможного заражения вирусами;
Обеспечить безопасность окружающего населения от заражения вирусными инфекциями через сточные воды, трупы экспериментальных животных и т.п.

(ИФА),

реакция иммунофлюоресценции (РИФ),

реакция связывания комплемента (РСК),

реакция пассивной гемагглютинации (РПГА),

реакции

торможения гемагглютинации (РТГА).

с примене­нием антигенов или антител, меченных ра­дионуклидом (I25J, 14C,

3Н, 51Сг и др.).
ИФА - выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой. После соединения антигена с ме­ченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом, и изменяется цвет продукта реакции.
РПГА основана на использова­нии эритроцитов(или латекса)с адсорбиро­ванными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеива­ние и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.

Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, ме­ченными флюорохромами, способны светить­ся в УФ-лучах люминесцентного микроскопа.
Непрямой метод РИФ заключается в вы­явлении комплекса антиген—антитело с по­мощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом.
РСК основан на активации комплемента комплексом антиген—антитело. Суть за­ключается в том, что при соответствии друг другу антигены и антитела образуют иммун­ный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент(С), т. е. происходит связывание комплемента комп­лексом антиген—антитело.
РТГА основан на блокаде, подавлении ан­тигенов вирусов антителами иммунной сы­воротки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты.

можно получать различные видимые проявления действия вируса:
Цитопатическое действие вируса

на культуру клеток (ЦПД) – возникновение в ней видимых морфологических дегенеративных изменений (литическая инфекция);
Приобретение заражённой культурой клеток способности к гемадсорбции – к адсорбции эритроцитов на поверхности клеточного слоя;
Образование в заражённой клеточной культуре под плотным слоем специального агарового покрытия характерных бляшек, являющихся «негативными колониями» вирусов;
Подавление процессов метаболизма в заражённой вирусом культуре клеток, выявляемое с помощью так называемой цветной пробы.

основан на способности двухспиральной ДНК к денатурации и ренатурации.

При постановке реакции молекулярной гибридизации зонды метят радиоактивной (Р32), флюоресцентной или биотиновой меткой, соединяют с исследуемым материалом, содержащим определяемую нуклеиновую кислоту, подвергающуюся денатурации. Если зонд комплементарен цепи определяемой нуклеиновой кислоты, происходит гибридизация в комплементарном участке.
После отжига зонд оказывается включённым в ренатурированную нуклеиновую кислоту и может быть обнаружен по имеющейся метке. Выявление наступившей молекулярной гибридизации позволяет установить природу определяемого вируса.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) или локальная амплификация нуклеиновых кислот (ЛАНК)
Метод тоже основан на способности ДНК к денатурации и ренатурации и на комплементарности цепей ДНК.
Важным принципом реакции является использование термостабильной ДНК-полимеразы, при участии которой происходит амплификация – умножение определяемых генов или фрагментов с определённой нуклеотидной последовательностью ДНК.
В результате реакции исследуемый генетический материал накапливается в значительном количестве и может быть легко выявлен и идентифицирован.

методам исследования. 3-е изд. – М.: Медицина, 1982.
Голубев Д.Б.

Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. – Л., 1986. Электронный учебник.
Yolken R.H., Lennette D.A., Smith T.F., Waner J.L. Algorithms for detection and identification of viruses. In: Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Yolken R.H., editors. Manual of clinical microbiology. 7th ed.; 1999. p.843-6.
Мейхи Б. Вирусология. Методы / Под ред. Б. Мейхи. – М.: Мир, 1988.