Что такое findslide.org?

FindSlide.org - это сайт презентаций, докладов, шаблонов в формате PowerPoint.


Для правообладателей

Обратная связь

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Яндекс.Метрика

Презентация на тему Лабораторная энзимодиагностика

Содержание

ФЕРМЕНТЫ (энзимы)- органические вещества белковой природы, которые синтезируются в клетках и во много раз ускоряют протекающие в них реакции, не подвергаясь при этом химическим превращениям
ЛЕКЦИЯЛабораторная энзимодиагностикаД. м. н. Соловьев В.Г. ФЕРМЕНТЫ (энзимы)- органические вещества белковой природы, которые синтезируются в клетках и во Схема ферментативной реакцииЕ – фермент;S – субстрат;ES – комплекс «фермент-субстрат»;Р1, Р2 – Типы специфичности ферментовСтереохимическая - (L- аспартатдекарбоксилаза) Абсолютная (субстратная) - (глюкокиназа)Относительная (групповая) - Свойства ферментов4) Зависимость ферментативной активности от физико-химических параметров средыОсновные факторы, влияющие на Активность фермента численно равна скорости ферментативной реакции в оптимальных условиях на начальном L. Michaelis1875-1949M. Menten1879-1960Зависимость от параметров среды аспартатаминотрансферазааспартатаминотрансферазаКодовое название (шифр)1.1.1.38 - малатдегидрогеназаНоменклатура ферментовСистематическое название Изоферменты – ферменты, катализирующие одну и ту же реакцию, но отличающиеся по Скорость реакции (V) – скорость, с которой уменьшается концентрация субстрата или увеличивается Спектр поглощения НАДН и НАД Способы измерения скорости реакции 1. По калибратору2. По калибровочной кривой3. По коэффициенту экстинкции продукта или кофермента Единицы измерения скорости реакцииМеждународная единица активности (U, МЕ, Е, Ед) - это Основные правила в лабораторной энзимологии1. Нельзя сильно встряхивать растворы ферментов и допускать Основные правила в лабораторной энзимологии3. Время начала и окончания ферментативной реакции следует Основные правила в лабораторной энзимологии5. Нельзя изменять соотношение «рабочий реагент/сыворотка». Его уменьшение Основные правила в лабораторной энзимологии7. Если активность фермента или другого аналита в Основные правила в лабораторной энзимологии9. Длина оптического пути кюветы для фотометрирования должна Основные правила в лабораторной энзимологии11. Калибровочную пробу, используемую для расчета концентрации аналита Основные правила в лабораторной энзимологии13. Рекомендуется как можно быстрей отделять сыворотку от Ферменты плазмы (сыворотки) крови1. Плазмоспецифические (выполняют свою функцию в плазме крови): ферменты Ферменты плазмы (сыворотки) крови2. Органоспецифические: синтезируются в клетках различных тканей, где и Задание к зачету (заполнить таблицу)
Слайды презентации

Слайд 2 ФЕРМЕНТЫ (энзимы)- органические вещества белковой природы, которые синтезируются

ФЕРМЕНТЫ (энзимы)- органические вещества белковой природы, которые синтезируются в клетках и

в клетках и во много раз ускоряют протекающие в

них реакции, не подвергаясь при этом химическим превращениям

Слайд 3
Схема ферментативной реакции

Е – фермент;
S – субстрат;
ES –

Схема ферментативной реакцииЕ – фермент;S – субстрат;ES – комплекс «фермент-субстрат»;Р1, Р2

комплекс «фермент-субстрат»;
Р1, Р2 – продукты реакции;
К1, К2, К3 –

константы равновесия.

Слайд 4 Типы специфичности ферментов
Стереохимическая - (L- аспартатдекарбоксилаза)
Абсолютная (субстратная)

Типы специфичности ферментовСтереохимическая - (L- аспартатдекарбоксилаза) Абсолютная (субстратная) - (глюкокиназа)Относительная (групповая)

- (глюкокиназа)
Относительная (групповая) - (трипсин, цитохром Р450)
Свойства ферментов
1. Высокая

биологическая активность

2. Лабильность – способность к небольшим изменениям нативной конформации, ведущая к уменьшению каталитической активности

3. Высокая специфичность


Слайд 5 Свойства ферментов
4) Зависимость ферментативной активности от физико-химических параметров

Свойства ферментов4) Зависимость ферментативной активности от физико-химических параметров средыОсновные факторы, влияющие

среды
Основные факторы, влияющие на скорость ферментативной реакции:

1. Концентрация субстрата;
2.

Концентрация фермента;
3. рН среды;
4. Температура среды;
5. Активаторы и ингибиторы

Слайд 6 Активность фермента численно равна скорости ферментативной реакции в

Активность фермента численно равна скорости ферментативной реакции в оптимальных условиях на

оптимальных условиях на начальном линейном участке кинетической кривой при

насыщающей концентрации субстрата

Слайд 7 L. Michaelis
1875-1949
M. Menten
1879-1960
Зависимость от параметров среды

L. Michaelis1875-1949M. Menten1879-1960Зависимость от параметров среды

Слайд 8 аспартат
амино
трансфер
аза
аспартатаминотрансфераза
Кодовое название (шифр)
1.1.1.38 - малатдегидрогеназа
Номенклатура ферментов
Систематическое название

аспартатаминотрансферазааспартатаминотрансферазаКодовое название (шифр)1.1.1.38 - малатдегидрогеназаНоменклатура ферментовСистематическое название

Слайд 9 Изоферменты – ферменты, катализирующие одну и ту же

Изоферменты – ферменты, катализирующие одну и ту же реакцию, но отличающиеся

реакцию, но отличающиеся по первичной структуре белка, кинетическим параметрам,

условиям активации, особенностям связи апофермента и кофермента

Изоферменты лактатдегидрогеназы (ЛДГ)

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

М

М

М

М

М

М

М

М

М

М

ЛДГ1

ЛДГ4

ЛДГ3

ЛДГ2

ЛДГ5

Н

М

Heart (англ.) - сердце

Muscle (англ.) - мышца


Слайд 10 Скорость реакции (V) – скорость, с которой уменьшается

Скорость реакции (V) – скорость, с которой уменьшается концентрация субстрата или

концентрация субстрата или увеличивается концентрация продуктов реакции

Скорость ферментативной реакции


Скорость

катализируемой ферментом реакции, а значит и его активность зависит от условий инкубации.
Так, повышение температуры всего на 1 °С приводит к увеличению скорости реакции на 2,5-20%, поэтому определение активности фермента проводят при фиксированных режимах (допустимо колебание ± 0,1°С).

Концентрацию продукта реакции или субстратов можно определить следующими способами:
1. Прямое фотометрирование;
2. Окрашивание продукта или субстрата красителями;
3. Тест Варбурга


Слайд 11 Спектр поглощения НАДН и НАД

Спектр поглощения НАДН и НАД

Слайд 12 Способы измерения скорости реакции

Способы измерения скорости реакции

Слайд 13 1. По калибратору
2. По калибровочной кривой
3. По коэффициенту

1. По калибратору2. По калибровочной кривой3. По коэффициенту экстинкции продукта или

экстинкции продукта или кофермента в восстановленной форме (НАДН, НАДФН)
Расчет

ферментативной активности

Формула Бугера-Ламберта-Бера:
Е = (∆А/мин х V х 1000) : (ε х l х v), где

Е – активность фермента, Е/л; ΔA/мин – изменение оптической плотности реакционной смеси за 1 мин, ед. опт. плотности/мин; V – объем реакционной смеси, мл; ε – миллимолярный коэффициент экстинкции, л/ммоль × см; l – длина оптического пути, см; v – объем пробы (сыворотки), мл; 1000 – коэффициент пересчета активности в мкмоль/(мин Ч л).


Слайд 14
Единицы измерения скорости реакции

Международная единица активности (U, МЕ,

Единицы измерения скорости реакцииМеждународная единица активности (U, МЕ, Е, Ед) -

Е, Ед) - это количество фермента, которое катализирует превращение

1 мкмоля субстрата или получение 1 мкмоля продукта в минуту в стандартных условиях.

Единица активности в системе СИ (катал) соответствует количеству фермента, которое катализирует превращение 1 моля субстрата в секунду.

1 катал = 6 × 107 МЕ
1 МЕ = 16, 67 × 10-9 катал


Слайд 15 Основные правила в лабораторной энзимологии

1. Нельзя сильно встряхивать

Основные правила в лабораторной энзимологии1. Нельзя сильно встряхивать растворы ферментов и

растворы ферментов и допускать образование пены при их перемешивании,

так как ферменты при этом могут инактивироваться в результате воздействия на них кислорода воздуха;


2. Растворенные, лиофильно высушенные реагенты, контрольные материалы и контрольные сыворотки, содержащие ферменты, перед использованием необходимо выдержать при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции, чтобы фермент пришел в конформационно-активное состояние;


Слайд 16 Основные правила в лабораторной энзимологии

3. Время начала и

Основные правила в лабораторной энзимологии3. Время начала и окончания ферментативной реакции

окончания ферментативной реакции следует фиксировать по секундомеру, причем в

случае определения активности ферментов и кинетических методов определения аналитов для каждой отдельной пробы, а не для серии целиком, иначе результаты анализа будут неверны;


4. Перед началом ферментативной реакции температуру рабочего реагента необходимо довести до значения, указанного в инструкции, и обеспечить его поддержание в течение всего времени анализа с точностью ±0,1°С;


Слайд 17 Основные правила в лабораторной энзимологии

5. Нельзя изменять соотношение

Основные правила в лабораторной энзимологии5. Нельзя изменять соотношение «рабочий реагент/сыворотка». Его

«рабочий реагент/сыворотка». Его уменьшение в целях экономии может привести

к получению заниженных результатов. При увеличении соотношения «рабочий реагент/сыворотка» снижается чувствительность метода;


6. Нельзя разбавлять рабочий реагент в целях экономии, так как при этом условия реакции (концентрация буфера, активаторов и т. д.) отклонятся от оптимальных, что приведет к занижению результатов;


Слайд 18 Основные правила в лабораторной энзимологии

7. Если активность фермента

Основные правила в лабораторной энзимологии7. Если активность фермента или другого аналита

или другого аналита в биологической жидкости превышает верхнюю границу

линейности набора, то исследуемую пробу необходимо разбавить строго в соответствии с рекомендациями, изложенными в инструкции к набору (чем разбавлять и во сколько раз);


8. Фотометрирование следует проводить в указанном в инструкции диапазоне длин волн, отклонение может существенно снизить чувствительность метода. В случае расчета концентрации аналита или активности фермента по коэффициенту экстинкции длина волны должна точно соответствовать указанной в инструкции;


Слайд 19 Основные правила в лабораторной энзимологии

9. Длина оптического пути

Основные правила в лабораторной энзимологии9. Длина оптического пути кюветы для фотометрирования

кюветы для фотометрирования должна соответствовать указанной в инструкции. Использование

кюветы с меньшей длиной пути снизит чувствительность метода;

10. При построении калибровочных кривых необходимо делать не менее 4–5 параллельных определений холостой пробы и каждого стандартного образца указанной в инструкции концентрации. Строить калибровочную кривую следует для каждой серии набора, а также при смене фотометрического оборудования.


Слайд 20 Основные правила в лабораторной энзимологии

11. Калибровочную пробу, используемую

Основные правила в лабораторной энзимологии11. Калибровочную пробу, используемую для расчета концентрации

для расчета концентрации аналита или активности фермента, необходимо ставить

для каждой серии анализов в четырех параллелях;

12. При работе с ферментативными наборами так же, как и при работе с другими наборами реагентов, желательно, а при отборе проб малых объемов (30–10 мкл) обязательно следует пользоваться поверенными автоматическими микродозаторами;


Слайд 21 Основные правила в лабораторной энзимологии

13. Рекомендуется как можно

Основные правила в лабораторной энзимологии13. Рекомендуется как можно быстрей отделять сыворотку

быстрей отделять сыворотку от сгустка. Хранение сыворотки также неблагоприятно

сказывается на результатах определения активности многих ферментов (они занижаются), поэтому следует измерять активность ферментов в сыворотке в день взятия крови у пациента;

15. Следует строго соблюдать условия хранения ферментативных наборов и их компонентов, указанные в инструкции, так как ферменты – термолабильные катализаторы. Хранение их при более высокой температуре может привести к быстрой инактивации. Некоторые ферменты в растворе при замораживании частично или полностью инактивируются.


Слайд 22 Ферменты плазмы (сыворотки) крови
1. Плазмоспецифические (выполняют свою функцию

Ферменты плазмы (сыворотки) крови1. Плазмоспецифические (выполняют свою функцию в плазме крови):

в плазме крови): ферменты свертывающей, противосвертывающей, фибринолитической систем и

др.

Б) О гипофункции органа, их синтезирующего (печень)

А) О наличии специфического патологического процесса (например, гемофилия )

Диагностическое значение имеет снижение активности

О чем это свидетельствует?


Слайд 23 Ферменты плазмы (сыворотки) крови
2. Органоспецифические: синтезируются в клетках

Ферменты плазмы (сыворотки) крови2. Органоспецифические: синтезируются в клетках различных тканей, где

различных тканей, где и выполняют свои функции
Гепатоциты (АЛТ, АСТ,

ЛДГ5)

Кардиомиоциты (АСТ, КФК, ЛДГ1)

Диагностическое значение имеет повышение активности

Это свидетельствует о разрушении клеток, синтезирующих данные ферменты:

Поджелудочная и слюнные железы (амилаза)

Простата (кислая фосфатаза)

Желчные протоки (γ-ГТФ)


  • Имя файла: laboratornaya-enzimodiagnostika.pptx
  • Количество просмотров: 107
  • Количество скачиваний: 0
- Предыдущая Темперамент
Следующая - Ёлочка