Презентация на тему Лабораторная энзимодиагностика

в клетках и во много раз ускоряют протекающие в

комплекс «фермент-субстрат»;
Р1, Р2 – продукты реакции;
К1, К2, К3 –

- (глюкокиназа)
Относительная (групповая) - (трипсин, цитохром Р450)
Свойства ферментов
1. Высокая

2. Лабильность – способность к небольшим изменениям нативной конформации, ведущая к уменьшению каталитической активности

3. Высокая специфичность

среды
Основные факторы, влияющие на скорость ферментативной реакции:

1. Концентрация субстрата;
2.

оптимальных условиях на начальном линейном участке кинетической кривой при

реакцию, но отличающиеся по первичной структуре белка, кинетическим параметрам,

Изоферменты лактатдегидрогеназы (ЛДГ)

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

Н

М

М

М

М

М

М

М

М

М

М

ЛДГ1

ЛДГ4

ЛДГ3

ЛДГ2

ЛДГ5

Н

М

Heart (англ.) - сердце

Muscle (англ.) - мышца

концентрация субстрата или увеличивается концентрация продуктов реакции

Скорость ферментативной реакции


Скорость

Концентрацию продукта реакции или субстратов можно определить следующими способами:
1. Прямое фотометрирование;
2. Окрашивание продукта или субстрата красителями;
3. Тест Варбурга

экстинкции продукта или кофермента в восстановленной форме (НАДН, НАДФН)
Расчет

Формула Бугера-Ламберта-Бера:
Е = (∆А/мин х V х 1000) : (ε х l х v), где

Е – активность фермента, Е/л; ΔA/мин – изменение оптической плотности реакционной смеси за 1 мин, ед. опт. плотности/мин; V – объем реакционной смеси, мл; ε – миллимолярный коэффициент экстинкции, л/ммоль × см; l – длина оптического пути, см; v – объем пробы (сыворотки), мл; 1000 – коэффициент пересчета активности в мкмоль/(мин Ч л).

Е, Ед) - это количество фермента, которое катализирует превращение

Единица активности в системе СИ (катал) соответствует количеству фермента, которое катализирует превращение 1 моля субстрата в секунду.

1 катал = 6 × 107 МЕ
1 МЕ = 16, 67 × 10-9 катал

растворы ферментов и допускать образование пены при их перемешивании,

2. Растворенные, лиофильно высушенные реагенты, контрольные материалы и контрольные сыворотки, содержащие ферменты, перед использованием необходимо выдержать при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции, чтобы фермент пришел в конформационно-активное состояние;

окончания ферментативной реакции следует фиксировать по секундомеру, причем в

4. Перед началом ферментативной реакции температуру рабочего реагента необходимо довести до значения, указанного в инструкции, и обеспечить его поддержание в течение всего времени анализа с точностью ±0,1°С;

«рабочий реагент/сыворотка». Его уменьшение в целях экономии может привести

6. Нельзя разбавлять рабочий реагент в целях экономии, так как при этом условия реакции (концентрация буфера, активаторов и т. д.) отклонятся от оптимальных, что приведет к занижению результатов;

или другого аналита в биологической жидкости превышает верхнюю границу

8. Фотометрирование следует проводить в указанном в инструкции диапазоне длин волн, отклонение может существенно снизить чувствительность метода. В случае расчета концентрации аналита или активности фермента по коэффициенту экстинкции длина волны должна точно соответствовать указанной в инструкции;

кюветы для фотометрирования должна соответствовать указанной в инструкции. Использование

10. При построении калибровочных кривых необходимо делать не менее 4–5 параллельных определений холостой пробы и каждого стандартного образца указанной в инструкции концентрации. Строить калибровочную кривую следует для каждой серии набора, а также при смене фотометрического оборудования.

для расчета концентрации аналита или активности фермента, необходимо ставить

12. При работе с ферментативными наборами так же, как и при работе с другими наборами реагентов, желательно, а при отборе проб малых объемов (30–10 мкл) обязательно следует пользоваться поверенными автоматическими микродозаторами;

быстрей отделять сыворотку от сгустка. Хранение сыворотки также неблагоприятно

15. Следует строго соблюдать условия хранения ферментативных наборов и их компонентов, указанные в инструкции, так как ферменты – термолабильные катализаторы. Хранение их при более высокой температуре может привести к быстрой инактивации. Некоторые ферменты в растворе при замораживании частично или полностью инактивируются.

в плазме крови): ферменты свертывающей, противосвертывающей, фибринолитической систем и

Б) О гипофункции органа, их синтезирующего (печень)

А) О наличии специфического патологического процесса (например, гемофилия )

Диагностическое значение имеет снижение активности

О чем это свидетельствует?

различных тканей, где и выполняют свои функции
Гепатоциты (АЛТ, АСТ,

Кардиомиоциты (АСТ, КФК, ЛДГ1)

Диагностическое значение имеет повышение активности

Это свидетельствует о разрушении клеток, синтезирующих данные ферменты:

Поджелудочная и слюнные железы (амилаза)

Простата (кислая фосфатаза)

Желчные протоки (γ-ГТФ)