FindSlide.org - это сайт презентаций, докладов, шаблонов в формате PowerPoint.
Email: Нажмите что бы посмотреть
2. Лабильность – способность к небольшим изменениям нативной конформации, ведущая к уменьшению каталитической активности
3. Высокая специфичность
Изоферменты лактатдегидрогеназы (ЛДГ)
Н
Н
Н
Н
Н
Н
Н
Н
Н
Н
М
М
М
М
М
М
М
М
М
М
ЛДГ1
ЛДГ4
ЛДГ3
ЛДГ2
ЛДГ5
Н
М
Heart (англ.) - сердце
Muscle (англ.) - мышца
Концентрацию продукта реакции или субстратов можно определить следующими способами:
1. Прямое фотометрирование;
2. Окрашивание продукта или субстрата красителями;
3. Тест Варбурга
Формула Бугера-Ламберта-Бера:
Е = (∆А/мин х V х 1000) : (ε х l х v), где
Е – активность фермента, Е/л; ΔA/мин – изменение оптической плотности реакционной смеси за 1 мин, ед. опт. плотности/мин; V – объем реакционной смеси, мл; ε – миллимолярный коэффициент экстинкции, л/ммоль × см; l – длина оптического пути, см; v – объем пробы (сыворотки), мл; 1000 – коэффициент пересчета активности в мкмоль/(мин Ч л).
Единица активности в системе СИ (катал) соответствует количеству фермента, которое катализирует превращение 1 моля субстрата в секунду.
1 катал = 6 × 107 МЕ
1 МЕ = 16, 67 × 10-9 катал
2. Растворенные, лиофильно высушенные реагенты, контрольные материалы и контрольные сыворотки, содержащие ферменты, перед использованием необходимо выдержать при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции, чтобы фермент пришел в конформационно-активное состояние;
4. Перед началом ферментативной реакции температуру рабочего реагента необходимо довести до значения, указанного в инструкции, и обеспечить его поддержание в течение всего времени анализа с точностью ±0,1°С;
6. Нельзя разбавлять рабочий реагент в целях экономии, так как при этом условия реакции (концентрация буфера, активаторов и т. д.) отклонятся от оптимальных, что приведет к занижению результатов;
8. Фотометрирование следует проводить в указанном в инструкции диапазоне длин волн, отклонение может существенно снизить чувствительность метода. В случае расчета концентрации аналита или активности фермента по коэффициенту экстинкции длина волны должна точно соответствовать указанной в инструкции;
10. При построении калибровочных кривых необходимо делать не менее 4–5 параллельных определений холостой пробы и каждого стандартного образца указанной в инструкции концентрации. Строить калибровочную кривую следует для каждой серии набора, а также при смене фотометрического оборудования.
12. При работе с ферментативными наборами так же, как и при работе с другими наборами реагентов, желательно, а при отборе проб малых объемов (30–10 мкл) обязательно следует пользоваться поверенными автоматическими микродозаторами;
15. Следует строго соблюдать условия хранения ферментативных наборов и их компонентов, указанные в инструкции, так как ферменты – термолабильные катализаторы. Хранение их при более высокой температуре может привести к быстрой инактивации. Некоторые ферменты в растворе при замораживании частично или полностью инактивируются.
Б) О гипофункции органа, их синтезирующего (печень)
А) О наличии специфического патологического процесса (например, гемофилия )
Диагностическое значение имеет снижение активности
О чем это свидетельствует?
Кардиомиоциты (АСТ, КФК, ЛДГ1)
Диагностическое значение имеет повышение активности
Это свидетельствует о разрушении клеток, синтезирующих данные ферменты:
Поджелудочная и слюнные железы (амилаза)
Простата (кислая фосфатаза)
Желчные протоки (γ-ГТФ)