Презентация на тему Реакция бласттрансформации лимфоцитов

реакции бластной трансформации (РБТЛ) с использованием митогена - фитогемагглютинина

(ФГА).

Реакция бласттрансформации характеризует способность лейкоцитов к трансформации и размножению под воздействием антигенов, аллергенов и митогенов.

выраженности специфической сенсибилизации организма.

Реакция бласттрансформации применяется для комплексной оценки

иммунного статуса больного.

ФГА: 50-70%
2) Для РБТЛ с антигеном: отрицательный

Материал для анализа

РБТЛ:
Плазма крови.
Забор крови осуществляется в пробирку с гепарином. Кровь должна быть доставлена в лабораторию в течение 2 часов.

часы натощак. Накануне исследования и в день забора крови

исключить жирную пищу.

Факторы, влияющие наРБТЛ:
Снижают: цитостатики, иммунодепрессанты, кортикостероиды, облучение ионизирующей радиацией.

"среде культивирования" разливают в 96-луночную панель по 200 мкл

в лунку (по три лунки на каждый образец) и инкубируют в СО-инкубаторе (5% СО) при температуре 37 град.С в течение 72 ч.
добавляют Н-тимидин в объеме 25 - 50 мкл в среде RPMI-1640 на лунку и инкубируют в тех же условиях еще 16 - 24 ч.
по окончании инкубации клетки переносят на фильтры, фильтры после сушки в термостате помещают во флаконы, содержащие по 3 мл сцинтилляционной жидкости (на 1 л толуола 0,2 г РОРОР и 5 г РРО).

митогенов осуществляют так же, как спонтанную, только в опытные

лунки добавляют Т- или В-клеточные митогены (не менее 3 лунок на каждый митоген) в оптимальной стимулирующей дозе (КонА 1 - 15 мкг/мл, ФГА 10 - 15 мкг/мл, ЛПС 15 - 100 мкг/мл). Контролем служат лунки с взвесью лимфоцитов без добавления митогенов.

Например, КонА стимулирует тимоциты, зрелые и незрелые Т-клетки,

ФГА стимулирует пролиферацию только зрелых Т-клеток. Такие митогены, как липополисахарид и бактериальный липопротеин, стимулируют пролиферацию В-клеток.
Благодаря этой селективности митогены могут использоваться для характеристики функционального состояния различных субпопуляций иммунокомпетентных клеток.

помощью бета-счетчика. Учет реакции можно проводить визуально, определяя

процент бластных форм лимфоцитов. Результаты представляют в виде индексов стимуляции клеток (ИСК), которые подсчитывают по формуле:

имп./мин. в культуре с митогеном
ИСК = ------------------------------------------------
имп./мин. в культуре без митогена

аллергических и аутоаллергических заболеваниях, активация антитрансплантационного иммунитета, острый период

первичной инфекции, иммунный ответ на тимусзависимые антигены.

Снижение: онкологические заболевания, вторичные иммунодефициты, первичные иммунодефициты, СПИД, тяжёлые вирусные инфекции, тяжёлые ожоги, травмы.