Презентация на тему 11. Серологические методы диагн

доставки его в лабораторию,
несовершенная методика бактериологического исследования
угнетение жизнеспособности

или гибели возбудителя под действием проводимого лечения (если материал берется не в первые дни заболевания, а уже на фоне этиотропной терапии)

обнаружения данных видов,
массивность роста бактерий в высевах на

плотные питательные среды,
антигенная и фаговаровая однородность выделяемых субкультур
диагностического нарастания титров гомологичных антител при серологических исследованиях.

в организме больного — бактериоскопическое и бактериологическое исследования;

методы

косвенного доказательства наличия возбудителя в организме больного —иммунологические исследования, направленные на обнаружение специфических антигенов в инфицированном материале или антител в сыворотке крови и различных секретах организма больного.

учение) –

методы изучения определенных антител в сыворотке крови

больных,

выявления антигенов микроорганизмов или тканей с целью их идентификации,


основанные на реакциях иммунитета.

с антителом.

определяемая данной тест-системой.

При определении антител – процент образцов, давших

положительный результат в данной тест-системе, от общего количества обследованных образцов, содержащих выявляемые антитела.

тест-системе, от общего количества обследованных образцов, действительно не содержащих

выявляемый маркёр.

того, что пациент с положительным результатом анализа действительно болен

(инфицирован).
Отрицательное прогнозируемое значение (ОПЗ) – вероятность того, что пациент с отрицательным результатом анализа действительно здоров (не инфицирован).

антителом (агглютинация, преципитация)
Опосредованные реакции или непрямые, взаимодействие атнигена и

антитела через посредника (реакция непрямой гемагглютинации, реакция связывания комплемента)
Реакции с использованием меченых антител или антигенов (иммуноферментный, радиоиммунный анализ, метод флюоресцирующих антител).

агглютинации
Физ. р-р + культура микроорганизмов
Сыворотка (1:100) + культура микроорганизмов
Возможна

спонтанная агглютинация – R-формы бактерий

итал. врач) — метод извлечения противобактериальных антител из иммунной

сыворотки крови путем их сорбции на убитых бактериях соответствующего штамма (удаление АТ, реагирующих с групповыми АГ); применяется для изучения антигенных свойств бактерий, главным образом кишечной группы, а также для изготовления моноспецифических сывороток.

или антител, основанный на возникающем в их присутствии феномене

агглютинации эритроцитов, на поверхности которых были предварительно адсорбированы соответствующие специфические антитела или антигены.
Отличается большей чувствительностью и специфичностью.

1. АГ (АТ) +эритроциты нагруженные эритроциты

2. Нагруженные эритроциты + иммунная сыворотка или АГ

Положительная
Реакция (зонтик)

Отрицательная
Реакция (пуговка)

(РПГА)
Эр
Эр
Эр
Эр
Эр
Эр

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг

Аг
+
+

Ат

Ат

Ат
Эритроцитарный
диагностикум

Ат

Ат

Аг

Аг
зонтик
Сыворотка

- нет гемагглютинации (пуговка) ;
- есть

гемагглютинация (зонтик).

антител в сыворотке крови больного.


в присутствии иммунной к вирусу

сыворотки крови агглютинация эритроцитов отсутствует

- торможение гемагглютинации (пуговка) ;
-

гемагглютинация (зонтик).

Исследуемый материал содержит вирус гриппа тип А с антигеном H3N2

Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации.

определяют по последней лунке с положительной РТГА.
титр антител равен

1:40.

эритроциты) используют в качестве носителя АГ.

Ревматоидный фактор - это аутоантитела анти-IgG (к Fc-фрагменту IgG) , относящиеся к классу IgM. В сыворотке ревматоидный фактор обычно присутствует в виде комплекса с IgG. В высоком титре ревматоидный фактор выявляется в крови у 80% больных с тяжелым прогрессирующим ревматоидным артритом .

S.aureus (неспецифически адсорбирует на своей поверхности Fc-фрагменты иммуноглобулина G)

Белок G стрептококков

Инертные носители (активированный уголь)

(в присутствии электролита)

Варианты:

в жидкой среде - по типу реакции

флокуляции, кольцепреципитации
в плотной среде в агаре (геле).

Оухтерлони,
радиальная иммунодиффузия по Манчини,
реакция иммуноэлектрофореза

энцефалит,
менингококковая инфекция и др.).

Жангу [по имени бактериологов Ж. Борде (J. Bordet) и

О. Жангу (О. Gengou), 1901], высокоспецифичная и очень чувствительная серологическая реакция, основанная на свойстве комплекса антиген — антитело фиксировать свободный комплемент, применяемая при диагностике многих бактериальных и вирусных и некоторых протозойных и гельминтозных болезней, а также для изучения процессов, сопровождающихся изменением количества антигена или антител.

и комплемента, в результате которого свободный комплемент связывается образовавшимся

комплексом АГ—АТ (специфич. фаза);
индикация реакции сенсибилизир. эритроцитами (неспецифич. фаза).
В РСК используют 2 системы: специфич. бактериол., состоящую из АТ (испытуемой сыворотки), АГ и комплемента, а также неспецифич. “индикаторную”, содержащую гемолизин (гемолитич. сыворотка) и взвесь эритроцитов барана. АГ соединяется с АТ только в присутствии комплемента. Если испытуемая сыворотка содержит АТ, гомологичные взятому АГ, то присутствующий в реагирующей смеси комплемент адсорбируется образующимся комплексом АГ—АТ и теряет способность лизировать сенсибилизированные эритроциты, т. е. без комплемента гемолизин (гемолитич. антитело) не разрушает эритроциты (реакция положительная). В тех случаях, когда между АГ и АТ испытуемой сыворотки нет специфич. родства, комплекс не образуется и комплемент остаётся в свободном состоянии. При добавлении гемолитич. системы в этом случае несвязанный комплемент вызывает гемолиз сенсибилизированных эритроцитов (реакция отрицательная).

комплемента (А. Р. Wassermann, нем. бактериолог, 1866-1925) - иммунологическая реакция,

применяемая в диагностике сифилиса)

Результаты реакции Вассермана: а - полная задержка гемолиза (+ + ++); б - выраженная задержка гемолиза (+ ++); в - частичная задержка гемолиза (++); г - слабая задержка гемолиза (+); д - полный гемолиз «лаковая кровь» (-). Реакция положительна при частичной, выраженной и полной задержке гемолиза, определяемой по степени окрашивания содержимого пробирок от светло-розового до ярко-красного. Негемолизированные эритроциты впоследствии образуют осадок красного цвета.

– универсальная
флюорисцирующая сыворотка
+ специфические АТ
+исследуемый АГ
Светящийся комплекс

Светящийся

комплекс

определения различных веществ : гормонов, белков сыворотки крови, лекарственных

препаратов, микробных антигенов.
Изотоп – 125 I.

АТ

АТ

АТ

АГ

АГ

АГ

+

АГ*

АГ*

АГ*

АТ

АТ

АТ

АГ

АГ

АГ

АГ*

АГ*

АГ*

АГ*

АГ*

АГ*

АТ

АТ

АТ

АГ

АГ

АГ

Меченный
радионуклеотидом АГ

АГ

АТ

АГ*

антиген

антитело

Твердая фаза

отрицательный контроли
Стоп- раствор
Буфер для разведения коньюгата
Коньюгат
Стрипированный микропланшет

с сорбированным антигеном

больного с сорбированными диагностическими антителами