Метод микроинъекции вирусных молекул ДНК является одним из методов введения рекомбинантных ДНК в клетки. Впервые данный метод был воспроизведен в 1970 году А. Грессманом при введении молекул ДНК в культивируемые клетки млекопитающих.
Слайд 2
Метод микроинъекции вирусных молекул ДНК является одним из
методов введения рекомбинантных ДНК в клетки. Впервые данный метод
был воспроизведен в 1970 году А. Грессманом при введении молекул ДНК в культивируемые клетки млекопитающих.
Слайд 3
Метод микроинъекции вирусных молекул ДНК относится к методам
трансгенеза, т.е. искусственного введения в геном дополнительной информации
(трансгена) и широко распространен в животноводстве.
Слайд 4
Процесс заключается во введении в клетку (цитоплазму или
ядро) малых объемов жидкости с помощью стеклянного микрокапилляра. Эксперимент
проводится на предметном столике микроскопа с применением микроманипуляторов и микрошприцев.
Слайд 5
Использую эту методику, удалось изучить биологическую активность молекул
ДНК разных вирусов. К достоинствам метода относится то, что
определенное количество препарата ДНК можно ввести в выбранную область клетки, в частности в ядро. Недостатком является его сложность и невысокая производительность.
Слайд 6
Метод микроинъекции вирусных ДНК применим к небольшим молекулам
ДНК, так как при продавливании через микрокапилляр целостность больших
молекул ДНК будет нарушаться вследствие гидродинамического сдвига. В силу отмеченных недостатков метод микроинъекции ДНК используется крайне редко.
Слайд 7
В животноводстве:
суть метода заключается во введении раствора генных
конструкций в мужской пронуклеус зигот. Степень интеграции, то есть
число трансгенных животных от общего числа родившихся животных, при использовании метода микроинъекции в зависимости от вида животных колеблется в незначительных пределах. Так, у мышей этот показатель в среднем составляет 15%, у свиней - 10-15%, у кроликов - 10%, у овец, коз и коров - 5-10%.
Слайд 8
Следует отметить, что на частоту интеграции при использовании
метода микроинъекции оказывают влияние такие факторы, как степень очистки
инъекционного раствора, форма и концентрация ДНК, состав буферного раствора для микроинъекции, качество эмбрионов, а также способ пересадки эмбрионов реципиентам.