Презентация на тему Современное состояние методов ХТА и приемущество применения различных методов экспресс анализа при острых отравлениях. СРС

суть, приемущества
5. Инструментальные методы
6. Литература

обнаружения,
количественного определения ядовитых и сильнодействующих веществ и их

метаболитов в биологических средах и в вещественных доказательствах отравления.
Главная задача ХТА заключается в оказании помощи врачам клинической токсикологии в диагностике острых отравлений.

спектрофотометрия в УФ и видимой области
ИК-спектрометрия
хроматография (ТСХ, ГХ, ВЭЖХ/МС)
иммунохимические

методы
атомно-абсорбционная спектрометрия (ААС) и атомно-эмиссионная спектрометрия с индуктивно-связанной плазмой (АЭС-ИСП)

скорость идентификации
Отсутствие ложноотрицательных/
ложноположительных результатов
Требования к подготовке пользователей
Экономичность

дала толчок появлению быстрых тестов,
Современные быстрые тесты позволяют

Поставить

анализ без дорогостоящего оборудования
Получить результат анализа сразу на приеме либо в течение часа
Не требуют обязательной отправки в лабораторию
Применяются врачами как на приеме так и на выездах и в полевых условиях

антигеном и соответствующим ему антителом (реакция антиген – антитело)
Антиген -

это вещество, которое чужеродное для организма животного и которое может запустить иммунную систему (защитную реакцию).
Антитела - это белки, которые выделяются клетками организма животного при внедрении в него антигена

подразделяются на:

Иммунохроматографические (ИХА)

Иммуноферментные (ИФА)

иммунохроматографического анализа (ИХА). В результате теста происходит классическая реакция

"антиген-антитело" с образованием иммунных комплексов, которые можно визуально обнаружить на тест-полоске.
Принцип действия состоит в том, что при погружении тест-полоски в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые аффинно (прочно и родственно) связываются с анализируемым веществом.

Одношаговая процедура с получением результата обычно в течение 10-15-20

минут.

Удобство: - Простой в использовании и легкий в прочтении результатов

это, в первую очередь, надежности и чувствительности тестов.
Надежность

и чувствительность зависит, во-первых, от качества используемых в тесте реагентов и, во-вторых, от концентрации антигена в биоматериале.
Качество используемых реагентов зависит от способов их получения, очистки и фиксации на полоске.
Концентрация антигена – от стадии заболевания и количества биоматериала.
Количество биоматериала особенно важно при использовании цельной крови.
Cущественную роль играет гематокрит, т.е. соотношение плазмы и форменных элементов. При высоком гематокрите снижается доля элементов антигена из плазмы по сравнению с форменными элементами

нет), измерение концентрации невозможно. При некоторых заболеваниях, они могут

быть малоинформативными (например FIP).
Экспресс-тесты (антигенные) «работают» только в течение ~ 3-7 дней после заражения (только при первоначальном воздействии антигена на организм животного) ( вирусные заболевания).
Минимальная определяемая ИХА концентрация антигена или антител сильно выше, чем у ИФА, что может давать «ложноотрицательный» результат на ранней стадии, поскольку уровень антигена/антител может быть слишком низким, чтобы обнаружить заболевание на ранней стадии.
Большой процент «ложноположительных» результатов, что мешает при исследовании животных на вирусоносительство.

чертой иммуноферментного анализа является то, что комплекс «антиген-антитело» выявляется

с помощью субстрата, который расщепляется ферментом с появлением окрашивания (ферментативное окрашивание).
При ферментативном окрашивании для достижения окраски требуется меньшее количество комплексов антиген-антитело, так как каталитические свойства ферментов позволяют действовать им в качестве усилителей: одна молекула фермента может способствовать образованию более 1•105 молекул продукта каталитической реакции в минуту, что обуславливает высокую чувствительность ИФА.

– более  надежный и  чувствительный  метод  для поиска антител 

и  антигенов и оценки их концентрации. 
Обеспечивает не только качественный, но и количественный результат.
Определяет относительный уровень титра - диагностирует болезнь, на гораздо более низком уровне титра, чем положительное пороговое значение в ИХА - тестах.
Позволяет подтверждать подозрительные случаи заболевания, за которыми в дальнейшем может быть изменение титра.
ИФА – анализ более точный в определении, он позволяет не только диагностировать заболевание , но и определить его стадию и отследить динамику развития болезни.

сложности и недостатки:

Длительность и сложность постановки по сравнению с

ИХА – методом и невозможность количественного учета результатов без специального оборудования.
Необходимо большое количество образцов (8-96) для постановки анализа.
Требуется специальная подготовка специалистов
Высокая стоимость оборудования для оснащения лаборатории.

использования инструментальных экспресс-методов определения токсичных веществ в биологических средах

организма (кровь, моча, цереброспинальная жидкость, диализирующие растворы и т.д.) в максимально короткие сроки (1-2 часа), обладающих достаточной точностью и специфичностью.
Этим требованиям отвечают физико-химические методы инструментального экспресс-анализа: тонкослойная хроматография (ТСХ), газожидкостная хроматография (ГЖХ), спектрофотометрия (СФМ), масспектрометрия и хроматомасспектрометрия. 

ГЖХ, оптимальными особенностями которого являются высокая специфичность и чувствительность,

быстрота проведения анализа (10-15 минут), малые количества исследуемого биосубстрата, сравнительная простота выполнения и достаточная объективность полученных результатов. С помощью этого метода возможно качественное и количественное определение ряда летучих токсичных веществ, таких как этиловый алкоголь и некоторые его суррогаты (спирты С, — С5, хлорированные углеводороды), ФОИ и др.

неподвижной фазы. Он основан на том, что разделяемые вещества

по-разному распределяются между сорбирующим слоем и протекающим через него элюентом, вследствие чего расстояние, на которое эти вещества смещаются по слою за одно и то же время, различается. Тонкослойная хроматография предоставляет большие возможности для анализа и разделения веществ, поскольку и сорбент, и элюент могут варьироваться в широких пределах. При этом коммерчески доступен ряд пластинок с различными сорбентами, что делает возможным быстрое и рутинное использование метода. Разновидностью тонкослойной хроматографии является более надёжная и воспроизводимая высокопроизводительная тонкослойная хроматография, при проведении которой используются специальные пластинки и сложное оборудование.