Слайд 2
Общие закономерности иммунологических методов:
Исследование проводится in vitro
Проявляются при
гомологичности антитела и антигена
Проходят в 2 фазы:
1)невидимая
– взаимодействие между антигеном и антителом
2)видимая – образование крупных агрегатов,которые видны невооруженным глазом
Слайд 3
Характеристики иммунологических реакций:
Чувствительность – отношение числа положительных реакций
у истинных больных к общему числу обследованных больных с
подтвержденным диагнозом.
Специфичность – отношение числа отрицательных реакций в контрольной группе к общему числу пациентов контрольной группы.
Слайд 4
Условия протекания реакций иммунитета:
Наличие антигена
Наличие антитела
Присутствие электролита
Слайд 5
Группы иммунологических методов:
Методы, основанные на прямом взаимодействии антигена
с антителом
Методы, основанные на опосредованном взаимодействии антигена с антителом
Реакции
с использованием меченых антигенов или антител
Слайд 6
Реакция агглютинации -
(от лат. agglutinatio
- склеивание) -склеивание (соединение) антигеннесущих корпускулярных частиц молекулами специфических
антител в присутствии электролитов, которое заканчивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината).
Слайд 7
Механизм реакции агглютинации:
(а) с IgM антителами
(б) с
IgG антителами
Слайд 8
Варианты реакции агглютинации:
Реакция агглютинации на предметном стекле в
капле сыворотки - ориентировочная
Слайд 9
Варианты реакции агглютинации:
Развернутая реакция агглютинации
Слайд 10
Постановка развернутой реакции агглютинации:
Агглютинирующая сыворотка – сыворотка, полученная
из крови животного,иммунизированного данным антигеном.
Титр агглютинирующей сыворотки
– наибольшее разведение антител, дающее видимую реакцию агглютинации.
Слайд 11
Направления использования реакции агглютинации:
Определение возбудителя, выделенного от больного:
используют как агглютинацию на стекле, так и развернутую реакцию.
Определение
антител в сыворотке крови больного (развернутая реакция агглютинации) - к разведениям сыворотки больного добавляют диагностикум:
- Агглютинация с 0-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие 0-антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации.
- Агглютинация с Н-диагностикумом (бактерии, убитые формалином, сохранившие жгутиковый Н-антиген) – в виде крупнохлопчатой, протекает быстрее.
Реакция агглютинации для определения групп крови.
Слайд 12
Реакция гемагглютинации (прямой)
- склеивание эритроцитов гемагглютининами вирусов:
Слайд 13
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации(РНГА)
- склеивание эритроцитов антителами за
счет антигенов, адсорбированных на поверхности эритроцитов
Слайд 14
Постановка РНГА
РНГА ставят в пластиковых планшетках или в
пробирках с разведениями сыворотки крови больного, к которым добавляют
антигенный эритроцитарный диагностикум – эритроциты с адсорбированными на них антигенами
Слайд 15
Постановка и учет РНГА.
Реакция положительна, если образуется фестончатый
осадок (“кружевной зонтик”).
Реакция отрицательна при образовании осадка в виде
пуговки.
Слайд 16
Реакция обратной непрямой гемагглютинации (РОНГА)
- обнаружение токсинов и
бактериальных антигенов в материале при помощи антительных эритроцитарных диагностикумов
– эритроцитов,на которых адсорбированы антитела.
Слайд 17
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА).
- основана
на блокаде антигенов (гемагглютининов) вирусов антителами иммунной сыворотки, в
результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты.
Слайд 18
Реакция коагглютинации.
- определение антигенов с помощью антительного диагностикума
- антител, адсорбированных на белке А клеток стафилококка.
Слайд 19
Реакция Кумбса (антиглобулиновый тест)
реакция агглютинации для выявления неполных
антител, например антител к Rh-фактору:
в систему антирезусные
антитела + Rh(+)-эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобулинов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов.
Слайд 21
Реакция преципитации
(от лат. praecipito - осаждать) - это
формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами
в виде помутнения, называемого преципитатом.
В реакции преципитации антигеном являются молекулярно-дисперсные вещества, а в реакции агглютинации - корпускулярные.
Преципитат образуется только тогда, когда количество антител эквивалентно количеству антигена.
Слайд 22
Варианты реакции преципитации:
Реакция кольцепреципитации
Реакция преципитации в агаровом геле:
реакция
двойной иммунодиффузии (по Оухтерлони)
реакция радиальной иммунодиффузии (по Манчини)
Иммуноэлектрофорез
Слайд 23
Реакция кольцепреципитации.
Ставится в узких преципитационных пробирках:
на иммунную сыворотку осторожно наслаивают растворимый антиген. При оптимальном
соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата.
Слайд 24
Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони.
В слое агарового
геля равномерной толщины на определенном расстоянии друг от друга
вырезают лунки для антигена и антисыворотки и заполняют их соответствующими растворами. Антигены и антитела диффундируют в гель, встречаются друг с другом и образуют иммунные комплексы, которые преципитируют в ячейках геля, становясь видимыми как линии преципитации.
Слайд 25
Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони.
3 варианта расположения линий
преципитации:
1. Обе линии полностью
сливаются. Это говорит об идентичности антигенов в обеих лунках.
2. Одна из линий длиннее другой и, выходя из нее, образует так называемую "шпору". В этом случае мы имеем дело с частично идентичными антигенами.
3. Линии пересекаются. Это указывает на неидентичность антигенных детерминант и, следовательно, на различие молекул исследуемых антигенов.
Слайд 26
Реакция радиальной иммунодиффузии (по Манчини).
В
геле,содержащем антитела, вырезают лунки и заполняют их раствором антигена.
Молекулы антигена радиально диффундируют из лунки и, встретившись с антителами, образуют кольцо преципитации.
Слайд 27
Иммуноэлектрофорез.
- сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации.
Слайд 28
Реакция преципитации в агаре для определения дифтерийного экзотоксина.
Слайд 29
Реакция флоккуляции (по Рамону)
{от лат. floccus
- хлопья шерсти} -
появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин-антитоксин или анатоксин-антитоксин.Применяют для определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина.
Наиболее интенсивная и ранняя (инициальная) флоккуляция – в пробирке, где антиген и антитело содержатся в эквивалентных соотношениях.
Слайд 30
Направления использования реакции преципитации:
В судебной медицине – для
определения видовой принадлежности белка в кровяных пятнах, сперме и
пр.
В санитарно-гигиенических исследованиях – для определения фальсификации пищевых продуктов
Реакция термопреципитации по Асколи (в качестве антигенов в реакции используют прокипяченные и профильтрованные экстракты тканей) - для определения антигена при диагностике сибирской язвы.
Слайд 31
Реакция связывания комплемента (РСК).
- реакция,
основанная на взаимодействии антигена и антитела с последующей активацией
(связыванием) комплемента. Если комплекс антиген-антитело не образуется, то комплемент остается свободным.
РСК проводят в 2 фазы:
1-ая – невидимая: инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент в термостате 30 мин. или в холодильнике 18-20 ч.
2-ая – индикаторная: выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка, содержащая антитела к эритроцитам).
Слайд 32
РСК с сывороткой больного.
В 1-й фазе реакции
при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, и
тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная).
Слайд 33
РСК с сывороткой здорового.
1-ая фаза: антиген и антитело
не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена
или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит - антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).
Слайд 34
Реакция иммунного прилипания
- основана на активации
системы комплемента (его С3b-компонента) корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными
иммунной сывороткой.
На эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах имеются рецепторы для компонентов комплемента, благодаря чему при смешивании этих клеток с иммунными комплексами, несущими С3b, происходят их соединение и агглютинация.
Слайд 35
Иммунное прилипание стафилококков к эритроциту посредством иммуноглобулинового покрова
(ИП), образовавшегося в результате отложения Ig, комплемента и других
белков на клеточной стенке бактерий. Электронная микроскопия (по А. С. Быкову)
Слайд 36
Реакция радиального гемолиза
ставят в лунках геля из агара,
содержащего эритроциты барана и комплемент. После внесения в лунки
геля гемолитической сыворотки (антител против эритроцитов барана) вокруг них, в результате радиальной диффузии антител, образуется зона гемолиза.
Реакцию используют для определения:
активности комплемента и гемолитической сыворотки,
наличия антител в сыворотке крови у больных гриппом, краснухой, клещевым энцефалитом (для этого на эритроцитах адсорбируют соответствующие антигены вируса, а в лунки геля, содержащего данные эритроциты, добавляют сыворотку крови больного).