Слайд 2
Семейство Vibrionaceae
Род
Vibrio
Вид
Vibrio cholerae
Источник инфекции: человек — больной холерой и здоровый (транзиторный) вибриононоситель.
Несмотря на то, что выделение возбудителя в окружающую среду происходит в течение короткого времени, большое количество скрытых форм поддерживает циркуляцию возбудителя.
Соотношение носители/больные может достигать от 4:1 до 10:1.
Основной механизм передачи – фекально-оральный, реже - контактный.
Факторы передачи – вода, пищевые продукты, объекты окружающей среды.
Заражение происходит главным образом при питье необеззараженной воды, заглатывании воды при купании в загрязнённых водоёмах и пр.
Слайд 3
Биохимические свойства.
Сбраживают с образованием кислоты (без газа)
глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннозу, маннит, лактозу (сравнительно медленно), левулёзу,
гликоген и крахмал.
Диагностическое значение имеет ферментация маннозы, сахарозы и арабинозы (триада Хёйберга); холерные вибрионы разлагают только маннозу и сахарозу и принадлежат к 1 группе Хёйберга (по отношению к этим трём углеводам все вибрионы разделяют на 6 групп).
Разжижают желатину с образованием «воронки» с пузырьком воздуха вверху, гидролизуют казеин. Обладают плазмокоагулирующим действием (свёртывают плазму кролика) и фибринолитическим (разжижают свёрнутую сыворотку по Лёффлеру).
Свёртывают молоко и разлагают другие белки и их дериваты до аммиака и индола. H2S не образуют. Восстанавливают нитраты.
Слайд 4
Патогенез холеры
Симптомы заболевания вызываются не самим холерным вибрионом,
а продуцируемым им холерным токсином.
Входные ворота инфекции - пищеварительный
тракт. Вибрионы колонизируют поверхность эпителия тонкого отдела кишечника, не проникая, однако, внутрь его и выделяют экзотоксин (холероген) - термолабильный белок. Экзотоксин способствует выходу в просвет кишечника огромного количества изотонической жидкости с низким содержанием белка и высокой концентрацией ионов натрия, калия, хлоридов, гидрокарбонатов. Развивается диарея, рвота и обезвоживание. Потеря жидкости, гидрокарбонатов и калия ведёт к развитию метаболического ацидоза, гипокалиемии.
Кроме экзотоксина, холерный вибрион имеет эндотоксин - термостабильный ЛПС, сходный по структуре и активности с эндотоксинами прочих грамотрицательных бактерий. Эндотоксин проявляет иммуногенные свойства, индуцируя синтез вибриоцидных AT.
Слайд 5
Лабораторная диагностика.
Цель исследований: выявление больных и бактерионосителей;
установление оконча-тельного диагноза при исследовании погибших; контроль за эффективностью
лечения больных и санации носителей; контроль над объектами внешней среды и эффективностью дезинфекционных мероприятий.
Материалы для исследований - испражнения, рвотные массы, жёлчь, секционный материал (фрагменты тонкой кишки и жёлчного пузыря), постельное и нательное бельё, вода, ил, сточные воды, гидробионты, смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты, мухи и др.
Слайд 6
Наилучшие результаты даёт исследование проб, взятых до начала
антибактериальной терапии.
Материал отбирают в стерильную посуду без следа
дезсредств.
Испражнения в количестве 10-20 мл отбирают резиновыми катетерами, или используют ректальные тампоны.
При исследовании желчи отбирают порции В и С (доставляют нативный материал).
Все образцы помещают в герметически закрываемую транспортную тару. Материал следует доставлять в лабораторию не позже 2 ч после забора. При невозможности образцы помещают в транспортные среды (наиболее удобна 1 % пептонная вода с рН 8,2-8,6).
Слайд 7
Водопроводную воду (1 л) отбирают в стерильную посуду
(по 500 мл) после обжигания кранов и пред-варительного слива
в течение 10 мин.
Сточные воды (1 л) также отбирают в 2 ёмкости.
Гидробионтов (рыб и лягушек, по 10-15 экземпляров) помещают в герметичные стеклянные банки.
Смывы с объектов отбирают с площади 25 см2 ватными тампонами, смоченными 1% пептонной водой (в которой их транспортируют в лабораторию).
Для посева используют жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально-диагностические среды.
На всех этапах исследования посевы выращивают на пептонной воде 6-8 ч, пептонной воде с теллуритом калия 12-18 ч, на щелочном агаре не менее 14-16 ч, на элективных плотных средах 18-24 ч.
Для ускоренной диагностики болезни применяют РИФ и РНГА.
Слайд 8
Исследование больных, бактерионосителей и трупного материала проводят в
четыре этапа.
I этап. Материал засевают на накопительную среду, на
щелочной агар или одну из элективных сред (например, TCBS-arap).
II этап (через 6-8 ч после начала исследования). Изучают рост на первой среде накопления и производят высев на щелочной агар и вторую среду накопления. Если на первом этапе при исследовании нативного материала ускоренными методами получают положительные результаты, пересев на вторую среду накопления не производят. При отрицательных результатах ускоренные методы повторяют после 6-часовой инкубации в первой среде накопления.
Слайд 9
III этап (через 12-14 ч после начала исследования).
Изучают рост на второй среде накопления; производят высев со
второй среды накопления также на щелочной агар. С чашек отбирают для дальнейших исследований не менее 5 подозрительных колоний и высевают на лактозно-сахарную среду или среду Клиглера.
IV этап (через 18-24 ч после начала исследования). Проводят отбор подозрительных колоний в посевах на плотные среды нативного материала, а также в посевах со 2-й накопительной среды.
Слайд 10
Морфология Vibrio cholerae Прямые или изогнутые подвижные палочки,
грамотрицательные
Культуральные свойства.
Факультативный анаэроб с более выраженными аэробными свойствами; быстро
погибает в анаэробных условиях. Не образует спор.
Хорошо растёт на простых питательных средах при высоком рН среды (7,6-8,0).
На жидких средах вызывает помутнение и образование нежной голубоватой плёнки на поверхности
Слайд 11
На твёрдых средах Vibrio cholerae образует небольшие круглые
дисковидные прозрачные S-колонии с ровными краями, голубоватые в проходящем
свете.
Слайд 12
На агаре с тиосульфатом, цитратом, солями жёлчных кислот
и сахарозой (TCBS-агар) Vibrio cholerae образует жёлтые колонии.
Слайд 13
Подозрительные колонии исследуют в РА на стекле («слайд-агглютинация»)
с О1-антисы-вороткой, а также с сыворотками Инаба и Ога-ва
в разведении 1:50-100. Если серотипирова-ние вибрионов обычными антисыворотками даёт отрицательный результат, то их прове-ряют с холерными сыворотками R0 и 0139 в реакции слайд-агглютинации.
Из культур готовят мазки для окраски по Граму и проб с люминесцирующими сыворотками. Затем проводят биохимическую идентификацию выросших микроорганизмов.
Слайд 14
Антигенная структура. У холерных вибрионов выделяют термостабильные О-
и термолабильные Н-Аг.
По структуре О-Аг выделяют 139 серогрупп;
На
основании биохимических и биологических различий холерные вибрионы разделяют на 2 биовара (биотипа): классический (V. cholerae asiaticae) и Эль-Тор (V. cholerae eltor).
Возбудители классической холеры и холеры Эль-Тор относятся к О1 серогруппе (при исследовании на холеру обязательно проводят типирование О1-анти-сывороткой).
О-Аг 01 группы холерных вибрионов неоднороден и включает А, В и С компоненты, разные сочетания которых присущи сероварам Огава (АВ), Инаба (АС) и Хикоджима (ABC)
Слайд 16
В начале 1993 г. появились сообщения о вспышках
холеры в юго-восточной Азии, вызванных вибрионами ранее неизвестной серогруппы,
обозначенных как серовар 0139 (Бенгал).
Вибрионы серовара 0139 не агглютинируются видоспецифической О1 и типоспецифическими Огава-, Инаба- и RO-сыворотками, устойчивы к полимиксину и не проявляют гемолитическую активность.
Все Vibrio cholerae лизируются бактериофагом группы IV (по Мукерджи, 1963), а вибрионы биовара Эль-Тор - фагами группы V.
Слайд 17
Тест на резистентность V. Cholerae к бактериофагу IV
и полимиксину В.
Слайд 18
Препараты для специфической профилактики холеры
Холероген-анатоксин - очищенный и
концентрированный препарат, полученный из центрифугата бульонной культуры холерного вибриона,
обезвреженного формалином.
Предназначен для создания активного искусственного иммунитета против холеры. Вакцинация и ревакцинация проводятся по эпидемиологическим показаниям однократно за месяц перед эпидемическим сезоном.
Холерная вакцина относится к числу убитых корпускулярных вакцин и готовится на основе вирулентных штаммов холерного вибриона классического биотипа или биотипа Эль-Тор серотипов Инаба и Огава, инактивированных нагреванием или формалином.
Вакцина холерная бивалентная химическая таблетированная представляет собой смесь холерогена-анатоксина и О-антигенов, полученных из бульонных культур холерного вибриона сероваров Инаба и Огава. Вакцина обеспечивает антибактериальный, антитоксический и местный кишечный иммунитет длительностью до 6 месяцев. Ревакцинацию проводят через 6-7 мес после первичной вакцинации.
Холерный бактериофаг. С тех пор, как в 1926 г. Ф.Д.Эрелль получил хорошие результаты при лечении холеры бактериофагом, этот метод терапии приобрел широкое распространение. Однако в последующем результаты фаготерапии оказались менее обнадеживающими и недостаточно постоянными. Существующие разновидности бактериофага не подавляют развитие вибриона Эль-Тор в организме экспериментальных животных и человека. Согласно заключению Комитета экспертов ВОЗ, в настоящее время нет убедительных материалов, свидетельствующих об эффективности фаготерапии холеры.
Слайд 19
Семейство Vibrionaceae
1. изогнутые подвижные палочки
2. распространены повсеместно;
широко представлены в морской, пресной воде и часто колонизируют
организмы водных животных.
3. хемоорганотрофы; метаболизм окислительный и бродильный
4.температурный оптимум для большинства видов 37°С
5. оксидаза-положительны
6. ферментируют глюкозу и другие углеводы с образованием кислоты.
7. нуждаются во внесении в среду 2-3% раствора NaCl.
Слайд 20
Род Vibrio
Род образуют прямые или изогнутые палочки; характерна
подвижность (один или несколько жгутиков).
Хемоорганотрофы; метаболизм окислительный и
бродильный. Оксидаза-положительны
Температурный оптимум вариабелен; от 20 до 30°С.
Восстанавливают нитраты, D-глюкозу ферментируют до кислоты. Сбраживают мальтозу, маннозу и трегалозу.
Наибольшее медицинское значение имеют V. cholerae, V. parahaemolyticus и V. Vulnificus. Типовой вид рода – V. cholerae.
Слайд 21
Прочие патогенные виды Vibrio.
Среди них доминируют поражения,
вызванные V. parahaemolyticus и V. vulnificus.
Vibrio parahaemolyticus -
галофильный вибрион; возбудитель большинства случаев острых диарей в Японии; вызванные им поражения также регистрируют в странах Юго-Восточной Азии, Африки и Латинской Америки (до 20% диарей), в том числе у туристов. Основные факторы передачи - блюда из морских продуктов, длительно хранимые в тёплом месте и приготовленные с нарушениями технологического процесса. В более редких случаях наблюдают поражения, вызванные употреблением сырых моллюсков и рыбы, а также пищи, обрызганной морской водой. Возбудитель вырабатывает энтеротоксин, вызывающий энтерит.
Слайд 22
Диагностику проводят выделением возбудителя на средах, применяемых для
выделения Vibrio cholerae (чаще для исключения холеры) с определением
роста на TCBS-arape (образует оливково-зелёные колонии, т.к. не ферментирует сахарозу) и способности утилизировать орнитин.
Vibrio vulnificus входит в состав микробных ценозов эстуариев рек умеренных и тёплых регионов Тихоокеанского и Атлантического побережий и концентрируется в «природных фильтрах» - двухстворчатых моллюсках (устрицах, мидиях, гребешках и т.д.). Воз-будитель обладает уникальной способностью вызывать 2 типа различных поражений - септицемии и гнойные раневые процессы.
Слайд 23
Септицемии развиваются после употребления моллюсков и проявляются буллёзными
поражениями кожи. Поражения с большей частотой регистрируют у лиц
с нарушениями иммунитета, заболеваниями печени, почек и сахарным диабетом. 50% случаев заканчивается летально.
Раневые инфекции обусловлены контактом ран с контаминированной морской водой; они могут быть умеренными либо прогрессировать до тяжёлых целлюлитов и миозитов, имитирующих газовую гангрену. Тяжесть поражений, вызываемых V. vulnificus, зависит от степени патогенности возбу-дителя и состояния организма. Факторы патогеннос-ти - капсула, защищающая бактерии от действия фагоцитов, и комплекс ферментов, включающий ци-тотоксин-гемолизин, эластазу, коллагеназу и фосфолипазы.