Презентация на тему Возбудители зоонозных инфекций

профессор Рамазанова Б.А

острое инфекционное эпидемическое заболевание, характеризующееся тяжелой интоксикацией, лихорадкой, поражением

лимфатической и сосудистой систем, тенденцией к септицемии и смертельной коме. Особоопасная карантинная инфекция. Передается от грызунов к человеку при посредстве эктапаразитов, грызунов.
Чума известна на востоке за 1000 лет до н.э.
1894 г.- в Гонконге во время чумы, ИЕРСЕН и КИТАЗАНТО независимо друг от друга обнаружили возбудителя чумы в гное бубонов у чумных больных и в органах чумных крыс.

иногда они приобретали характер пандемий. Первая достоверная пандемия 527-565

гг. («юстинианова чума»), начавшаяся в Египте и Эфиопии, привела к огромным потерям среди населения Восточной Римской империи.
Самой опустошительной была вторая пандемия чумы в XIV-XV веках, вошедшая в историю под названием «великой» или «чёрной» смерти и унёсшая около 60 млн жизней. Только в Европе погибло более 25 млн человек.
По свидетельству Н.М. Карамзина, целиком вымерло население городов Глухов и Белозёрск, а в Смоленске уцелело лишь 5 человек.
Третья пандемия чумы началась в Гонконге в 1894 г. и за 20 лет унесла жизни 10 млн человек. В самом её начале были сделаны важные открытия (выделен возбудитель, доказана роль крыс в эпидемиологии чумы), что позволило организовать профилактику на научной основе.
Возбудитель чумы обнаружили Г.Н. Минх (1878) и независимо А. Иерсен и Ш. Китазато (1894). Большой вклад в изучение эпидемиологии чумы внесли исследования Д.С. Самойловича (первые в Европе), В.И. Исаева и Н.Н. Клодницкого, а также И.И. Мечникова, руководившего работой противочумных отрядов в Астраханской губернии (1911). В 40-х годах в Северной Африке была отмечена последняя эпидемическая вспышка; тем не менее с 1958 по 1979 г. в мире зарегистрировано 47 000 случаев чумы.
Последнюю вспышку чумы отметили в Индии (вторая половина 90-х годов).  

(неравномерно расположена цитоплазма)

-ГРАМ (-)

-ЖГУТИКОВ НЕТ, СПОР НЕ ОБРАЗУЕТ

-НА СРЕДАХ

С КРОВЬЮ И В ОРГАНИЗМЕ БОЛЬНОГО – КАПСУЛА.
 

выращенных вагаре Хоттин­гера в течение 48 ч при тем­пературе

26-28 ос.
а - штамм 1300; б - штамм КМ 872; в - штамм ЕV. Ок­раска по Граму
(а, б), крис­таллическим фиолетовым (в) х 1150.
Микробы располагаются без определенной закономерности и имеют форму овоидов, прямых или слегка искривленных пало­чек с закругленными полюсами. Возможно нитеобразование.
Ок­раска большинства клеток равно­мерная.

свинок, погибших от чумы. Штаммы 1300 (а), К 872

(б). Окраска фуксином Циля. x1l50.
Микробы имеют цилиндрическую либо овоидную и бочкообразную формы. Многие клетки окрашены бипо­лярно.

брюш­ной полости пораженной мор­ской свинки в предагональ­ном состоянии.
Аноптральный

контраст. Иммобилизация кле­ток желатиновым гелем. х1350. Форма микробов цилиндрическая, полюса сферические. Протоплазма обладает равномерной оптической плотностью. Полиморфизм микро­бов не выражен. Большинство со­ставляют живые клетки. Деление микробов изоморфное. Макрофаги отличаются наличием ядра и зна­чительно большими размерами.

флаконах с бульо­ном Хоттингера в течение 24 ч при

шуттелировании. Штамм 1300. Аноптраль­ный контраст. Иммобили­зация клеток желатиновым гелем. x1350.
а - выращивание при тем­пературе 37-39 ос,
б - 26-280с.
Чумные микробы имеют ци­линдрическую форму и сфери­ческие полюса, их оболочка на всем протяжении одинаковой толщины и светопреломляю­щей способности. Протоплаз­ма характеризуется равномер­ной светооптической плотно­стью и не содержит включений, которые могли быть матери­альной основой биполярности, выявляемой в окрашенных маз­ках. Микробы, выращенные при температуре 37-39 ос, отлича­ются большими длиной и диа­метром.

ч при температуре 37-39 ос в пе­рева ре Хоттингера

с добав­лением витаминов и ионов кальция. Влажный тушевой метод. Фазовый контраст. х 1350.
а - штамм 1300; б штамм КМ 872.
Капсула наблюдается в виде светлых ореолов вокруг тем­ных клеток. Размеры капсулы у отдельных микробов могут существенно варьировать.

Хоттингера, при электронной микроскопии. Штамм 1300. Конт­растирование фосфорно-вольфра­мовой кислотой

(б, в), напылени­ем хрома (а). х 15 000 (а), х20 000 (б, в).
Независимо от способа приготовления препаратов и температуры выращива­ния у чумных микробов выявляются цилиндрическая форма, закругленные полюса и отсутствие в цитоплазме ка­ких-либо включений, которые могли бы быть основой для биполярной ок­раски. При оттенении хромом у кле­ток, выращенных при температуре 37- 39 ос, снаружи от клеточной стенки имеются остатки капсулы (а). Вслед­ствие высокого сродства биополиме­ров капсулы к фосфорно-вольфрамо­вой кислоте такие клетки отличаются высокой электрон но-оптической плот­ностью (б). Поверхность бескапсуль­ных микробов покрыта складками (в).

Хоттингера при температуре 37-39 ос в течение 18 ч.

а-в - штамм 1300; г - штамм ЕУ. х40 000 (а-в); х80 000 (г).
Капсула имеет фибриллярное строение и окружает клетки в виде бахромы или короны без чет­кой границы. Вещество капсулы с клеточной стенкой связано непрочно. У одних клеток капсу­ла массивная (а-в), у друтих она менее выражена (г).

возбудителя чумы. Штамм 1300. Контрастирование рутениевым красным х 80

000 (а); х40 000
(б-г).
Электронно - плотные продукты реакции окружают клетку в виде бахромы и не образуют сплошного слоя, что указывает на очаговую локализацию кислых мукополисахаридов в структуре капсулы. Внешняя мемб­рана имеет асимметричное строение (а-в). Нуклеоид массивный (в) или диффузный (б, г).

меченными ферритином. Штамм ЕV. х40000 (а, б); х80000 (б);

х100 000 (г).
Частицы комплекса ферритин - иммуноглобулин располагаются на клеточной стенке и фиб­риллах капсулы (а-г). Фрагмент клеточной стенки с равномерным расположением ферро­глобулинов (г).

Хоттин­гера в течение 24 ч при температуре 26-28 ос.

Штамм 1300. х40 000 (а, г); х80 000 (б, Д); х60 000 (в).
Внешняя и цитоплазмагическая мембраны имеют трехслойное строение (а-в). Периплазма может быть электронно-прозрачной (д), заполняться материалом средней плотности к электронам (а) и со­держать пептидогликановый слой (б). В цитоплазме находятся рибосомы и полисомы (а-в), вакуо­ли (г) и нуклеоид в различной степени обособленности (а, г). На поверхности клеток могут быть ве­зикулы (а, б, д).

- см. рис. 1.10. Штамм 1300. хзо 000 (а,

б); х80 000 (в).
Закладка перетяжки (а), углубление перетяжки с образованием равновеликих клеток (б), формирование полюсов клеток в зоне перетяжки (в). Внутриклеточные включения отличаются высокой плотностью по отношению к электронам (б).

24 ч при температуре 26-28 ос в жидких питательных

средах из солянокислотного гидролизата казеи­на, не оптимизированных по минераль­ному составу. Штамм 1300. Аноптраль­ный контраст. Иммобилизация клеток желатиновым гелем. х 1350.
Нарушения качественного состава сред при­водят к усилению гетерогенности микробов по размерам и увеличению содержания мерт­вых (светлых в препарате) клеток. Одни ните­видные микробы жизнеспособны (а, б), дру­гие - нет (в).

выращивания - см. рис. 1.12. Штамм 1300. х60 000

(а, б, г, д, е); х80 000 (в).
Почки образуются в результате боковых выпячиваний тела кле­ток (а, б), неравномерного деле­ния (в, г), через дефекты в кле­точной стенке (д, е). От внешней среды они ограничены цитоплаз­матической мембраной (г, д, е) или клеточной стенкой и могут иметь элементы нуклеоида (а-в).

(Yersinia pestis) при 200-кратном увеличении. Изображение с сайта wikimedia.org
На

окрашенных электронных микрофотографиях различного масштаба представлены отдельные микробы и их колонии.

pestis. Фото с сайта webs.wichita.edu

НО ЛУЧШЕ С ДОБАВЛЕНИЕМ КРОВИ
- ТЕМПЕРАТУРА выращивания - 28-30оС
-

рН - 7,2-7,4
- молодые вирулентные колонии (R-КОЛОНИИ С ПЛОТНЫМ ЦЕНТРОМ, ВОКРУГ КРУЖЕВНАЯ КАЙМА)
-старые колонии, невирулентные (S-форма)
- в бульоне (ПЛЕНКА И СПУСКАЮЩИЕСЯ НИТИ В ВИДЕ СТАЛАКТИТОВ И ХЛОПЬЕВИДНЫЙ ОСАДОК).

Бактерии чумы нетребовательны к питательным средам. На бульоне через

48 ч образуют нежную плёнку на поверхности со спускающимися вниз нитями и хлопьевидный осадок (среда остаётся прозрачной). Также хорошо растут в желатине, не вызывая её разжижения.
На плотных средах возбудитель чумы при 37 С образуют сероватые слизистые (за счёт капсулообразования) S- или R-колонии. Вирулентные штаммы чумы образуют R-колонии.
Стадии роста чумы. Микроскопическое изучение колоний Y. pestis выявляет три стадии роста. Через 10-12 ч культивирования вырастают «молодые» бесцветные микроколонии с неровными краями («битое стекло»). Через 18-24 ч они сливаются, формируя нежные плоские образования с фестончатыми краями и приподнятым центром («кружевные платочки»). Через 40-48 ч наблюдают «зрелые» колонии — крупные, с бурым зернистым центром и неровными краями («ромашки»).
Пигментообразование чумы. Многие, особенно вирулентные штаммы Y. pestis способны образовывать тёмный пигмент и обесцвечивать красители (например, метиленовый синий).

при температуре 26-28 ос.

Штамм 300. Микрофотосъемка в падающем

свете. х56.
а - 10-12 ч выращивания, образуются плоские нежные микроколонии с неровными краями, на­поминающие кружевные платочки; б - 20-24 ч выращивания,
у микроколоний формируется выпуклый желтый, бурый или темно-коричневый центр и тонкая, почти прозрачная фестончатая периферическая зона.
 

исследовании в проходящем свете. Условия выращивания - см. рис.

1.14. Штамм 1300. х13. Центр колоний выпуклый или запавший, коричневый или желтый (а). Периферическая зона полу­прозрачная и кружевная. Колонии по внешнему виду напоминают цветок ромашки (а, б).

исследовании в падающем свете. Условия выращивания - см. рис.

1.14.
а - штамм 1300; б - штамм ЕУ. х13.
Колонии серо-желтые, по форме близки к полусфере с мелкозернистой поверхностью и ровными или слегка фестончатыми краями.

исследова­нии в падающем свете. Ус­ловия выращивания - см. рис.

1.14. Штамм 1300. ЮЗ.
При увеличении продолжитель­ности культивирования центр колоний западает, перифери­ческая зона становится плот­ной (а) либо узкой или исчеза­ет (б).
Поверхность может при­обретать исчерченность (в).
 

ч на агаре Хот­тингера с добавлением генцианвиолета.
Штамм КМ

872. Микрофотосъемка в падающем свете. хз (6).
Колонии темно-сиреневые с белым ободком, не имеют «кружевной каемки» (а, б).

выращенных в течение 120 ч при температуре 26-28 ос

на среде Джек­сона- Барроуза.
а - штамм 1300; б - смесь штаммов 1300 и ЕУ.
Микрофотосъемка в падающем (а) и проходящем (б) свете. х13 (б).
Бактерии вирулентных штаммов возбудителя чумы обладают способностью сорбировать гемин из питательной среды и образуют черно-бурые колонии (а).
При увеличении в про­ходящем свете они черно-коричневые, а у вакцинного штамма ЕУ - светлые (б).

желатин
-образуют гиалуронидазу, фибринолизин, коагулазу
-не свертывают молоко
3 типа:
1ТИП - НЕ

ФЕРМЕНТИРУЮЩИЙ ГЛИЦЕРИН (Индия, Индокитай, Южная Корея )

2ТИП - ФЕРМЕНТИРУЕТ ГЛИЦЕРИН (Африка, Сибирь Монголия)

3ТИП - ФЕРМЕНТИРУЕТ ГЛИЦЕРИН И НИТРОЗОООТРИЦПТЕЛЬНЫЕ (Юго-восток СНГ).

АНТИГЕНЫ возбудителя чумы:
Около 20 Аг
О-соматический Аг-термостабильный

Хорошо изучены капсульные Аг, особенно Д,F-1,T,W,V-термолабильные

F-1 –поверхностный, белковый Аг –используется для серологической диагностики (РНГА)

W- обладает антифагацитарной активностью

МОЛОКЕ-90 СУТ
В ТРУПАХ-50 СУТ
В МОКРОТЕ-10 СУТ
ФРУКТАХ-11 СУТ
ХЛЕБЕ - 4

СУТ
-ЧУВСТВИТЕЛЕН К ВЫСЫХАНИЮ И ВЫСОКОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ,УФО, А/Б
КИПЯЧЕНИЕ- 1 МИН
5% РАСТВОР ФЕНОЛА-10 МИН
5% ЛИЗОЛ-10 МИН.

крыс. Полевые крысы заражают домашних крыс и мышей); С

потеплением климата популяция крыс стремительно растет, а это грозит эпидемией чумы. Особо опасная карантинная инфекция, способная к эпидемическому распространению

ИСТОЧНИК ИНФЕКЦИИ:

В начале вспышки чумы - грызуны,
затем люди, болеющие преимущественно легочной формой

Представление с сайта en.wikipedia.ru

и др), зайцеобразные

Большой тушканчик

является едва ли не самым старым заразных недугом. Возбудитель

чумы переносят блохи, которые побывали на больных крысах

Азиатская крысиная блоха Xenopsylla cheopis передает чумную палочку от крыс к людям

(БЛОХИ, КЛОПЫ, ВШИ) – может протекать в хр. Форме.

Имеется 99 видов блох, которые переносят чуму. Они могут быть носителями чумы в течении 1 года.
-ЧУМА БУБОННАЯ У ЧЕЛОВЕКА
-ЧУМА ЛЕГОЧНАЯ У ЧЕЛОВЕКА

ПУТИ ЗАРАЖЕНИЯ ЧЕЛОВЕКА:

-КОНТАКТНЫЙ
-ТРАНСМИССИВНЫЙ (УКУС БЛОХ)

-реже АЛИМЕНТАРНЫЙ

-МЕХАНИЗМ ЗАРАЖЕНИЯ ЧУМОЙ ЧЕЛОВЕКА ОТ ЧЕЛОВЕКА - аэрогенный

КАПСУЛА

- ФЕРМЕНТЫ АГРЕССИИ (гиалуронидаза, фибринолизин, коагулаза)

- БАКТЕРИОЦИНЫ (пестицины)

- W,V

антигены с антифагоцитарной активностью
 

НЕПОВРЕЖДЕННУЮ КОЖУ И СЛИСИЗТЫЕ КОНТАКТНЫМ ПУТЕМ (бубонная форма)

, ВОЗДУШНО КАПЕЛЬНО (легочная форма), если укус в кровеносный капилляр, то развивается первичная септицемия.
Бубонная форма может перейти во вторичную легочную или во вторичную септическую формы.
Инкубационный период от нескольких часов до 2-6 дней, у привитых – до 10 дней.
Проникшие бактерии активно поглощаются фагоцитами, однако фагоцитоз носит незавершенный характер ( в л/у развивается серозно - геморрагическое воспаление , с развитием бубона) и способствует дальнейшему распространению возбудителя. Одновременно чумная палочка распространяется лимфогенно, вызывая множественный лимфаденит. Затем возбудитель проникает в кровоток и диссеминирует в различные органы и ткани (септико-пиемические очаги).

от места проникновения до лимфатических барьеров
Распространение бактерий из

л/у в кровоток (бактериемия)
Распространение микробов до забарьерных клеточных систем (генерализованная септицемия)
Заболевание начинается остро: Температура повышается до 39С и выше, озноб, явления интоксикации (резкая головная боль, разбитость, мышечные боли, помрачения сознания), больной возбужден.
Летальность при диссеминированных формах до 100%, при локализованных до 70%, при а/б терапии до 10%.

ОЧАГИ ИИНФЕКЦИИ
ГЕНЕРАЛИЗАЦИЯ ПРОЦЕССА

формы в среднем 3-6 сут.
При септической и первично-легочной

чуме инкубация обычно сокращается до 1-2 сут и может удлиняться у людей, ранее вакцинированных.

формы:
-кожная
-бубонная
Генерализованные формы:
-первично - и вторичносептическая
Внешне - диссеминированные формы:
-первично -

и вторично - легочная; вторично-кишечная
Характерный клинический признак чумы, появляющийся в месте входных ворот инфекции бубон ( л/у , увеличенный до размера лесного ореха, куриного яйца).
Для всех форм чумы характерны внезапность заболевания, озноб и быстрый подъем температуры до 39-40С, которая без лечения стойко держится на высоких уровнях

Средневековья с лица Земли почти треть Европы - поразила

59-летнего американца. Пол Гейлрод подхватил заразу, когда пытался вытащить мышь из пасти своего задыхающегося кота по кличке Чарли. Как видно из фотографии, чума уничтожила пальцы мужчины на руках и ногах.

по эпид. показаниям (живая вакцина штаммом EV- иммунитет 1

год; химическая чумная вакцина)
- Экстренная специфическая профилактика и терапия чумы (противочумный иммуноглобулин)
-Химиотерапия чумы (стрептомицин и др)
-В природных очагах (дератизация , дезинсекция)

(на выявление плазмид pPst, pCas, pFa чумного микроба)

-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ

-БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ (ориентировочный)

. Необходимо дифференцировать от возбудителя псевдотуберкулеза (сходны по морфологии).

-БИОПРОБА ( на белых мышах, морских свинках, кроликах)

пустулы при кожной форме;
содержимое бубона при бубонной форме;

мокрота, слизь из зева и мазок с миндалин при легочной форме;
испражнения при кишечной форме;
кровь - при всех формах;
в зависимости от поражений отдельных органов и систем исследуют мочу (при наличии в ней крови) и цереброспинальную жидкость (при менингеальных явлениях);
при вскрытии (аутопсии) берут кусочек бубона и материал кожных поражений, лимфатические узлы, кусочки органов трупа, кровь из по­лости сердца, костный мозг (при наличии загнивания);
при исследовании КРОВОСОСУШИХ членистоногих (блохи и др.) - содержимое их кишечника;
лимфатические узлы, органы и кровь синантропных (крысы, мыши) и других погибших (и болеющих) грызунов.

из бубона, мокрота, испражнения, кровь и др.) готовят мазки,

высушивают их на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова 20-30 мин. Мазок окрашивают по Граму и метиленовым синим.
Для обнаружения в нативном материале фракции 1 чумного микроба ста­вят РПГА с иммуноглобулиновым и реакцию нейтрализации антител (РНАт) с антигенным диагностикумами или окрашивают чумной люминесцирую­щей сывороткой (МФА),
а в более поздние сроки ставят РПГ А с антигенным и реакцию нейтрализации антигена (PНAт) с иммуноглобулиновым диагно­стикумами для поиска антител к FI чумного микроба в крови больного.
 

плотные и жидкие питательные среды: агар и бульон Хотгингера

или Мартена с до­бавлением к ним стимуляторов роста: кровь , сульфит натрия и др.
Стимуляция необходима, так как посевная доза может быть недостаточной.
Материал (мокрота, слизь зева, содержимое вскрывшегося бубона, язвы, органы трупа человека без признаков разложения), содержащий постороннюю микрофлору, засевают на среду Туманского , содержащую генциановый фиолетовый в концентрации 1:200- 1:800 тысяч в зависимости от результатов специального контроля его инги­бирующего действия на соответствующие тест-штаммы. Посевы инкубируют в термостате при температуре 28 ос, а для обнаружения фракции 1 чум­ного микроба - при 37 Ос.
В 1-й день исследования может быть поставлена проба с фагом - ускоренный метод.
Исследуемый материал наносят на 3 чашки со средой Туманского:
в одну чашку вносят одну каплю исследуемого материала и одну каплю чумного фага, растирают их шпателем;
в другую чашку засевают материал, а затем у края чашки наносят каплю фага и дают ей стечь в виде «дорожки»;
В третью чашку (контрольная) вносят только материал и делают его рассев.

введения исследуемого материала зависит от его характера.
Мокроту, слизь

из зева, гной из открытого абсцесса вводят путем втирания в кожу брюшной стенки (предварительно кожу эпилируют, обрабатывают стерильным изотоническим раствором натрия хлорида и скарифицируют).
На скарифицированный участок наносят исследуемый материал, втирая его плоской частью скальпеля, под прикрытие м специальной воронки или стерильной крышки от чашки Петри. Незагрязненный материал (кровь, содержимое закрытого бубона и т. д.) вводят животным подкожно или внутрибрюшинно.
В зависимости от метода введения животное погибает на 3-9-й день. Для ускоренной диагностики поэтапно вскрывают животных
на l-e сутки (одну белую мышь, обработанную гидрокортизоном),
3-и сутки (морскую свинку, обработанную гидрокортизоном),
а остальных - на 6-е сутки.

на плотной и жидкой питательной среде. Из бульонной культуры

при типичном росте делают мазки, окрашивают их по Граму и метиленовым синим и микроскопируют. С плотной питательной среды отбирают типичные колонии с целью выделения чистой культуры и ее идентификации.
На две-три подозрительные в отношении возбудителя чумы колонии наносят чумной бактериофаг. После инкубации в термостате через 10-12 ч про водят анализ результатов пробы с чумным бактериофагом. Лизис колоний под действием чумного бактериофага имеет диагностическое значение.
Анализируют результат ускоренной пробы с чумным бактериофагом.
При наличии в исследуемом материале возбудителя чумы отмечают:
на 1-й чашке - стерильные пятна,
на 2-й - стерильную «дорожку» на месте нанесения фага,
на 3-й - типичные колонии чумного микроба

подлежит идентификации на основании следующих признаков:
-характерной морфологии микроба

(микропрепараты из нативного материа­ла и чистых культур), колоний на агаре и роста в бульоне Хотrингера;
-чувствительности к чумному бактериофагу;
-специфического свечения при люминесцентной микроскопии (МФА) чистой культуры;
-наличия специфического для чумного микроба АГ фракции FI, выяв­ленной в РПГ А и РНАт;
-ферментативной активности - расщепление глицерина, мочевины, рамнозы, сахарозы, глюкозы и др.
-Одновременно с идентификацией проводят определение чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений или методом дисков.

результатов идентификации по следующим тестам:
- на чувствительность к

чумному бактериофагу и антибиотикам;
- на наличие фракции 1, выявленной методом МФА, в РПГА или РНАт;
на определение ферментативной активности
Учитывают пробу с чумным бактериофагом - лизис колоний чумного
микроба.
-Проводят дифференциацию чумных бактерий от бактерий псевдотуберкулеза
-Продолжают наблюдение за биопробными животными, зараженными в l-й день исследования.

специфических Аг

2) неподвижность (палочки псевдотуберкулеза подвижны)

3) чувствительность к чумному

фагу

4) отсутствие ферментации рамнозы
 

кой (МФА), посев на специальные элективные среды. Дальнейшее иссле­дование проводят описанным выше способом.

чумы, определяются не только хромосомными, но и плазмидными генами.

У них обнаружены плазмиды, очень сходные с плазмидами У. pestis, которые кодируют синтез антигенов V—W и наружных белков (Yop), таких же, как у У. pestis, и других факторов вирулентности.
Они имеют общий с У. pestis кластер генов, связанных с системой транспорта железа.
Установлено, что У. pseudotuberculosis синтезирует термостабильный токсин, вызывающий гибель морских свинок при внутрибрюшинном заражении. Важную роль в патогенезе псевдотуберкулеза играет способность возбудителя к адгезии и колонизации слизистой кишечника.