Презентация на тему Методы определения чувствительности к антибактериальным препаратам

сред
приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулюма)
инокуляция
инкубация
учет и интерпретация результатов, формулировка

для оценки чувствительности определяют выбранным методом проведения исследования (агар

готовят в соответствии с инструкцией изготовителя.
Важным моментом при

заполнения чашки оставляют при комнатной температуре для застывания.
Хранить

для всех методов тестирования является стандартизация суспензии исследуемого микроорганизма,

чистую суточную культуру микроорганизмов, выросших на плотных питательных средах.

растущих бактерий с обычными питательными потребностями для приготовления инокулюма

ВаСl2 в концентрации 0,048 моль/л (1,175% раствор ВаСl2 x

всех методов серийных разведений является приготовление растворов АБП. Различают

1000,0 мкг/мл и выше. Навески АБП для приготовления базовых

m АБ теор. – расчётная (теоретическая) навеска АБП;
С – необходимая концентрация АБП;
V теор. – объём растворителя для растворения теоретической навески;
А – активность АБП (количество активного вещества, содержащегося в субстанции)

невозможно. Поэтому готовят близкую к расчётной навеску, а затем

V практ. – объём растворителя для растворения практической навески;
m АБ практ. –полученная навеска АБП;
m АБ теор. – расчётная (теоретическая) навеска АБП;
V теор. – объём растворителя для растворения теоретической навески;

величине конечного объема 0,2 мл и меньше).
Область применения

готовят из основного раствора с использованием жидкой питательной среды.

взвесь, эквивалентную 0,5 по стандарту МакФарланда, разведенную в 100

и все пробирки с тестируемыми штаммами, кроме пробирки "отрицательный"

МакФарланду (1,5 х 108 КОЕ/мл)
по 0,5 мл

хранения заранее приготовленных планшет.
Тестирование проводят при величине конечного

После внесения рабочих растворов антибиотиков в лунки, запаянные в

в бульоне необходимо проводить контроль роста культуры в среде

в агаре позволяет одновременно определить МПК партии штаммов (от

основного раствора исследуемого АБП готовят рабочий раствор в концентрации

среду растворяют и автоклавируют в соответствии с инструкцией изготовителя.
После

посевная доза исследуемого микроорганизма на поверхности питательной среды должна

суспензий периодически рекомендуется проводить подсчет реальных колониеобразующих единиц путем

проводят, поместив чашку на темную не отражающую свет поверхность.

то, что методы серийных разведений являются наиболее точными и

между двумя зонами, то МИК читаем по значению меньшей

2

1

3

МИК .
МИК оцениваем как минимальный.

3
3
3
2
2
2
1
1
1

способности АБП диффундировать из пропитанных ими бумажных дисков в

соблюдать правила хранения дисков ( в целях избежания снижения

стерильных ватных тампонов. Тампон необходимо погрузить в стандартную суспензию

после инокуляции на поверхность питательной среды наносят диски с

и между дисками должно

в термостат кверху дном и инкубируют при температуре 35

на темную матовую поверхность так, чтобы свет падал на

на зону полного подавления видимого роста. Не следует обращать

подавления роста, свидетельствуют о наличии посторонней микрофлоры или о

зона подавления роста может быть затянута тонкой вуалеобразной пленкой,

чувствительности дрожжеподобных грибов рода Кандида к:
амфотерицину В
нистатину
клотримазолу
флуконазолу
итраконазолу
кетоконазолу

плотно закрытых флаконах, и сухом, защищенном от света месте,

с рН не ниже 6,0. Для дисков с амфотерицином

48 часовой культуры гриба в изотоническом растворе хлорида натрия

на равном расстоянии друг от друга и плотно прижимают

данные

с оценкой по пограничной концентрации).
Необходимое количество дисков (табл.) с

не выросшие при данной

микроорганизмов со сложными питательными потребностями является методически одной из

стрептококков используют следующие питательные среды:
Для методов серийных разведений

терапии пневмококковых инфекций. В то же время критерии интерпретации

бета-лактамным антибиотикам обусловлен изменением пенициллиносвязывающих белков (ПСБ) клеточной стенки.

*

*

*

*

*

*

Г(-)
в пери-
плазме

Г(+)
вне
клетки

S. pneumoniae с промежуточным уровнем резистентности к пенициллину, бета-лактамные

определения чувствительности S.pneumoniae:
невозможность определения чувствительности к бета-лактамным антибиотикам (пенициллину,

бета-лактамным антибиотикам подразумевает последовательное (выделение S.pneumoniae из нестерильных локусов)

ДДМ не позволяет получить воспроизводимые результаты, необходимо использовать метод

отличается от обычной процедуры определения чувствительности пневмококков к АБП

значимости в лечении пневмококковых инфекций являются макролидные и линкозамидные

характеристики чувствительности S. pneumoniae к рассматриваемой группе АБП достаточно

ципрофлоксацин и ломефлоксацин) не являются адекватными для лечения пневмококковых

других групп, для лечения пневмококковых инфекций применяют ко-тримоксазол, хлорамфеникол,

группы “viridans”, выделенных из нестерильных локусов в рутинной практике

чувствительности стрептококков группы “viridans” к эритромицину и другим макролидам,

группы по Лансфельд (А, B, C, G). Среди них

необходимость в оценке чувствительности возникает только для S. pyogenes

штаммов S, agalactiae , устойчивых к пенициллину не описано
2

диско-диффузионного метода и метода серийных разведений применимы только для

Haemophilus spp. необходимо использовать только специальную питательную среду HTM

на 1 л вносят 30,0 мл основного раствора гематина.
После

к большинству распространенных антибиотиков, в том числе, и к

к ампициллину связана с изменением мишени действия β-лактамных антибиотиков

в рутинной лабораторной практике достаточно определения чувствительности к ампициллину

активности в отношении Haemophilus spp., при этом между ними

influenzae встречается редко, однако частота встречаемости штаммов с повышенными

антибиотикам целесообразно проводить непосредственное выявление выработки бета-лактамаз в тесте

с определением МПК применимы только для метода серийных разведений

собой достаточно сложную методическую проблему. Методы определения чувствительности гонококков

г
L-цистеингидрохлорид 25,9 г
L-глютамин 10 г
L-цистин 1,1 г
Аденин 1 г
Никотинамидадениндинуклеотид 0,25 г
Витамин В12 0,1 г
Тиамина пирофосфат 0,1

количестве дистиллированной воды и затем доводят объём до 1

в тех случаях, когда для лечения невозможно или нецелесообразно

чувствительности по МПК применимы только для метода серийных разведений

свидетельствует о резистентности к доксициклину

многим АБП (цефалоспоринам, аминогликозидам), а
клиническое значение наблюдаемой in

определения чувствительности Enterococcus spp. к АБП крайне важно оценить

являются препаратами выбора для лечения энтерококковых инфекций. Между пенициллином

энтерококки обладают природной устойчивостью к аминогликозидам, данный класс АБП

для лечения инфекций, вызванных штаммами, резистентными к бета-лактамам и

энтерококков, несмотря на отсутствие убедительных данных, возможно оценивать активность

резистентности при использовании метода разведения в бульоне
2 – критерии

или бульон на сердечно-мозговом экстракте. Питательная среда готовится в

инокуляция и инкубация
Микробную взвесь готовят путем суспендирования изолированных колоний

Исследуемый штамм рассматривается как резистентный при следующих условиях:
при скрининге

среда.
Агар на сердечно-мозговом экстракте. Питательная среда готовится в соответствии

инкубация.
Микробную взвесь готовят путем суспендирования изолированных колоний из 24-часовой

резистентный при росте более 1 колонии на агаре с

spp. в первую очередь необходимо тестировать препараты, имеющие основное

продукцией бета-лактамаз, либо с наличием пенициллино-связывающего белка - ПСБ2а.

бензилпенициллину является индикатором активности природных и полусинтетических амино-, карбокси-

бета-лактамным АБП должно включать выполнение двух тестов:
- определения

рекомендуется тестировать при высокой частоте метициллинорезистентности в ЛПУ, или

оценивать чувствительность Staphylococcus spp. к бета-лактамам кроме бензилпенициллина и

к бензилпенициллину Методы:
При использовании ДДМ Недостаток: возможно получение результатов

на которой оценивали чувствительность исследуемого штамма Staphylococcus spp. к

только прямой метод суспендирования колоний;
длительность инкубации до момента учета

рассматриваться как устойчивые ко всем бета-лактамным АБП.
Результаты определения чувствительности

Определение чувствительности к оксациллину

выделении пенициллино- и метициллино-чувствительных штаммов стафилококков микроорганизм считается чувствительным

Мюллера - Хинтон, содержащие 4% NaCl и 6,0 мкг/мл

Скрининг метициллинрезистентности

стандартного инокулюма, соответствующего стандарту мутности 0,5

Скрининг метициллинрезистентности

в течение полных 24 ч, а коагулазанегативных стафилококков -

Скрининг метициллинрезистентности

испытуемых культур на агаре Мюллера - Хинтон с 4%

один из представителей 14- и 15-членных макролидов. Полная перекрестная

из ведущих этиологических агентов как внебольничных, так и нозокомиальных

(мм) и МПК (мг/л) АБП

(мм) и МПК (мг/л) АБП

(мм) и МПК (мг/л) АБП

(мм) и МПК (мг/л) АБП

(мм) и МПК (мг/л) АБП

(мм) и МПК (мг/л) АБП

вызываемых представителями семейства Enterobacteriaceae, составляют β-лактамные антибиотики. Выбор препаратов

Ампициллин. Получаемые результаты можно полностью экстраполировать на амоксициллин. Оценивать

цефалоспорина практически идентичны по своим антибактериальным свойствам. Результаты оценки

оценке чувствительности к гентамицину, нельзя экстраполировать на другие аминогликозиды.
Фторхинолон.

в набор для исследования дополнительных антибиотиков определяется особенностью ЛПУ.

большей устойчивостью к хромосомным бета-лактамазам класса С в сравнении

реального значения в лечении инфекций, вызванных Enterobacteriaceae, однако может

микроорганизмов группы Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Morganella, Providencia необходимо указывать,

к хинолонам, как правило не вызывает затруднения. Штаммы, устойчивые

кишечных инфекций играют представители родов Shigella, Salmonella, Escherichia и

микроорганизмами рода Salmonella (выделение возбудителя из стерильных локусов), в

ИМП крайне важно разделять на внебольничные и нозокомиальные. Для

выявлению БЛРС фенотипическими методами распространяются только на штаммы Klebsiella

в ходе рутинной практики.
Для эффективного скрининга в рутинное

цефалоспоринов использовано для тестирования, тем более достоверными будут результаты

клавуланатом. При постановке этих тестов проводится сравнение чувствительности исследуемых

и инокуляции чашек с агаром стандартные. На поверхность агара

необходимо использовать два штамма (отрицательный и положительный контроли):
- отрицательный

использование доступных коммерческих дисков с цефалоспоринами III поколения и

и инкубации чашек не имеет отличий от стандартного ДДМ.

(действие которых в большинстве случаев обратимо клавуланатом), зона подавления

spp., Acinetobacter spp. и других НГОБ
При определении чувствительности НГОБ

для оценки антибиотикочувствительности Pseudomonas spp. и Acinetobacter spp. следует

выбора при лечении рассматриваемой группы инфекций.
Меропенем, имипенем. Меропенем

бактерии существенно различаются по уровню природной чувствительности к АБП.

реальное значение в лечении инфекций, вызываемых Acinetobacter spp. благодаря

как единую группу с точки зрения их природной чувствительности

НГОБ
1.ДДМ стандартизирован только для P.aeruginosa и Acinetobacter spp. Для

НГОБ

НГОБ

НГОБ

НГОБ

штаммы.
К сожалению ни один из традиционных микробиологических методов, основанных

использованного для оценки чувствительности, необходимо засеять на чашку с

партию плотных питательных сред для определения чувствительности

микроорганизмов готовят микробную

инкубацию при 35 °С в течение 24 или более

7,4.
Контроль катионного состава
Для

При определении чувствительности к АБП из группы

контрольных (референтных) штаммов микроорганизмов с соответствующими показателями, приведенными в

таким образом, чтобы возможность мутаций и контаминации культуры была

основных способа.
Первый состоит в приготовлении суспензии микроорганизмов в

тестированием клинических изолятов.
Однако на практике, при получении достаточно стабильных

(величины МПК АБП или диаметра зоны ингибиции роста) с

к АБП
Определение
Эпидемиологический надзор за антимикробной резистентностью представляет собой

надзора за антимикробной резистентностью на международном уделяет достаточно большое

за антибиотикорезистентностью микроорганизмов основное внимание следует уделять:
Инфекционным заболеваниям, встречающимся

уровню и характеру резистентности должны использоваться для:
Оценки временных тенденций

сложившейся ситуации с целью разработки стратегии по сдерживанию распространения

к проведению эпидемиологического надзора за антибиотикорезистентностью:
Постоянный мониторинг данных по

охвата:
Всеобъемлющий (полный) эпидемиологический надзор предусматривает исследование антибиотикорезистентности определенного микроорганизма

на ограниченной территории или у определённой части популяции для

отчётов с мест (когда не предпринимается специальных усилий по

данных:
Рутинный, включающий регулярное, систематическое получение определённого набора данных;
Расширенный, включающий

не ограничивается только сферой медицинской практики.
Подобные эпидемиологические исследования

При проведении рутинного эпидемиологического надзора за

Для эффективного проведения эпидемиологического надзора на каждом уровне

единых правил забора клинического материала,
критериев и определений инфекционных

для эпидемиологического надзора должно проводиться по единой методологии. Методики

микробиологии (смывы с оборудования, поверхностей, анализ микробной обсемененности воздуха,

условий их возникновения:
внебольничные
нозокомиальные (госпитальные).
Это имеет существенное значение

данных о частоте выделения определенных микроорганизмов и об этиологической

методам определения чувствительности, позволяющим получить значения МПК АБП в

очень важным.
В большинстве случаев для проведения рутинного эпидемиологического

также в целях научных исследований, набор АБП для проведения

антибиотикорезистентности:
умеренный или высокий уровень резистентности S. aureus к ванкомицину;
резистентность

известны два основных механизма распространения антибиотикорезистентности:
распространение генетических детерминант

можно разделить на
фенотипические (основанные на изучении антибиограмм, био-, серо-

как
воспроизводимость,
разрешающая способность,
стоимость,
трудоемкость проведения
особенности интерпретации

MLST – multilocus sequence typing) разработаны стандартные протоколы, что

лаборатории, участвующие в программах по эпидемиологическому надзору за антимикробной

процессе эпидемиологического надзора за антибиотикорезистентностью получаемые данные о чувствительности

надзора за антибиотикорезистентностью должен включать:
уникальный идентификационный код пациента (например, инициалы,

картины заболевания;
диагноз инфекции;
дату возникновения симптомов инфекции или установления

больших объемов информации, собранной при проведении эпидемиологического мониторинга за

позволяющих создавать в микробиологической лаборатории базы данных, содержащие всю

и расчета соответствующих эпидемиологических показателей могут потребоваться данные медицинской

образцы для микробиологического исследования
Численность обслуживаемого населения
Среднее число посещений
Количество микробиологических

получаемых результатов эпидемиологического мониторинга (например, ожидаемое число штаммов микроорганизмов

повторных изолятов
Для получения достоверных данных по антибиотикорезистентности в анализ

может быть включен повторный изолят данного вида микроорганизма, при

определенного микроорганизма или группы микроорганизмов к определенному АБП могут

промежуточной чувствительностью (П) и
чувствительных (Ч) штаммов в исследуемой популяции

АБП у микроорганизма данного вида, например, частота (%) выделения

представлению его результатов
Если число штаммов одного вида менее 10,

предоставление информации в соответствующие органы системы здравоохранения для разработки

за антибиотикорезистентностью, его результаты могут быть представлены
для внутренней