Слайд 2
Скрининг
Общий скрининг: исследование веществ, относящихся к
разным химическим и фармакологическим группам
Частный скрининг: исследование веществ внутри
группы и определение индивидуальных веществ
Слайд 3
ТРЕБОВАНИЯ К МЕТОДАМ АНАЛИТИЧЕСКОГО СКРИНИНГА
Универсальность
Достаточная специфичность
Высокая чувствительность
Экспрессность
Точность и
воспроизводимость
Простота и доступность
Возможность сочетания с другими методами
Слайд 4
Тонкослойная хроматография
Преимущества:
Высокая чувствительность
Экспрессность
Возможность широкого выбора сорбентов и
способов детектирования
Простота исполнения
Низкая стоимость анализа
Слайд 5
Тонкослойная хроматография
Разделение компонентов смеси
Идентификация токсических веществ и
их метаболитов в извлечениях из биоматериала
Очистка выделенных веществ от
соэкстрактивных соединений
Количественное определение токсикантов
Слайд 6
Пластинки
Стекло
Фольга
Полимеры (например политерефталат)
Слайд 7
Сорбенты
1. Для разделения липофильных веществ
Силикагель
Оксид
алюминия (III)
Ацетилированная целлюлоза
Полиамид
2. Для разделения гидрофильных веществ
Целлюлоза
Ионообменники целлюлозные
Кизельгур
Полиамиды
Слайд 8
Пластины для ТСХ
«Мерк»
«Силуфол»
«Силуфол УФ-254»
«Силуфол УФ-365»
«Сорбфил» «Плазмахром»
Слайд 9
Нормально - фазовый вариант ТСХ
НФ – немодифицированный силикагель
ПФ
– неполярные растворители (гексан, гептан, бензол, толуол, хлороформ…)
Особенность:
поверхность сорбента более полярная, чем элюент
Слайд 10
Обращенно – фазовый вариант ТСХ
Особенность:
сорбент неполярный, элюент
полярный
НФ – модифицированные силикагели (с привитыми алкильными группами С8,
С10, С16, С18)
ПФ – полярные растворители (вода, ацетонитрил, метанол, тетрагидрофуран)
Слайд 11
в основе разделения веществ в тонкослойной хроматографии –
процессы
распределения и адсорбции
Слайд 12
Тонкослойная хроматография
Подготовка пластинки, хроматографической системы, хроматографической камеры
Нанесение проб
на хроматографическую пластинку
Хроматографический процесс
Обнаружение (детектирование) компонентов на хроматограмме
Идентификация компонентов
на хроматограмме (при необходимости количественное определение)
Слайд 14
Трафарет для предварительной разметки хроматографических пластин
Слайд 15
Нагревательное устройство УСП-1
Слайд 17
Тонкослойная хроматография
Подготовка пластинки, хроматографической системы, хроматографической камеры
Нанесение проб
на хроматографическую пластинку
Хроматографический процесс
Обнаружение (детектирование) компонентов на хроматограмме
Идентификация компонентов
на хроматограмме (при необходимости количественное определение)
Слайд 18
Нанесение пробы
Наносимый объем извлечения – 1-10 мкл
Размер наносимого
пятна не более 3 мм
Слайд 19
Тонкослойная хроматография
Подготовка пластинки, хроматографической системы, хроматографической камеры
Нанесение проб
на хроматографическую пластинку
Хроматографический процесс
Обнаружение (детектирование) компонентов на хроматограмме
Идентификация компонентов
на хроматограмме (при необходимости количественное определение)
Слайд 20
Типы ТСХ
Восходящая
Нисходящая
Горизонтальная
Радиальная
Слайд 22
Восходящая ТСХ
линия старта
образец 1
образец 2
линия фронта
Слайд 23
Тонкослойная хроматография
Подготовка пластинки, хроматографической системы, хроматографической камеры
Нанесение проб
на хроматографическую пластинку
Хроматографический процесс
Обнаружение (детектирование) компонентов на хроматограмме
Идентификация компонентов
на хроматограмме (при необходимости количественное определение)
Слайд 24
Детектирование компонентов на хроматограмме
Визуально
Облучение в
УФ – свете
С помощью хромогенных реагентов
Слайд 25
Облучатель хроматографический
УФС-254/365
Слайд 26
Камера для опрыскивания хроматографических пластин
Пульверизатор для хроматографических
пластин
Слайд 27
Тонкослойная хроматография
Подготовка пластинки, хроматографической системы, хроматографической камеры
Нанесение проб
на хроматографическую пластинку
Хроматографический процесс
Обнаружение (детектирование) компонентов на хроматограмме
Идентификация компонентов
на хроматограмме (при необходимости количественное определение)
Слайд 28
Факторы, влияющие на величину Rf:
техника работы, качество и
толщина слоя сорбента, чистота растворителей, температура…
папаверин
антипирин
атропин
кодеин
Слайд 29
ТСХ веществ кислого и слабоосновного характера
Система: хлороформ:
н-бутанол: 25 % р-р аммиака
(70: 40: 5)
Детекция: ДФК + НgSО4, FeCl3
Метчик: фенобарбитал,
барбитал, барбамил
фенобарбитал Rf=0,27
барбитал Rf=0,41
салициловая кислота Rf=0,08
антипирин Rf=0,82
амидопирин Rf=0,87
аминазин Rf=0,90
Слайд 30
ТСХ веществ основного характера
Система: диоксан:
хлороформ: ацетон: 25%
р-р
аммиака (47,5: 45: 5: 2,5)
Метчик: атропин, кодеин, антипирин,
папаверин
Детекция: УФ → FeCl3→
р. Драгендорфа → Н2SО4
Атропин Rf=0,21
Кодеин Rf=0,32
Антипирин Rf=0,48
Папаверин Rf=0,65
Хинин Rf=0,35
Димедрол Rf=0,82
Амидопирин Rf=0,86
Аминазин Rf=0,88
Кофеин Rf=0,46
Слайд 31
Идентификация
Сравнение значения Rf анализируемого вещества с Rf метчика
Использование
табличных значений Rf веществ, полученных в аналогичных условиях (на
данном сорбенте, в данной хроматографической системе)
Слайд 32
Способы количественного определения
Непосредственно на хроматограмме
(планиметрия,
денситометрия)
После элюирования вещества с хроматограммы подходящим физико-химическим методом
Слайд 34
Методы тонкослойной хроматографии в определении подлинности и чистоты
лекарственных средств
Анализ таблеток анальгина 0,5 г
Анализ проводят по ФСП
42 – 0306 – 1435 – 01
Серия: 1101 2014
Аналитический паспорт: №1102от 20.02.2014 г.
Слайд 35
Оценить качество таблеток анальгина 0,5 г
по показателям:
«Описание»
«Посторонние примеси»
Слайд 36
Метамизол натрия (анальгин)
Химическое название:
[(1,5-Диметил-3-оксо-2-фенил-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-ил)(метил)амино]- метансульфонат натрия,
моногидрат
Слайд 37
1. Описание
Метод определения - визуальный
Таблетки белого цвета
плоскоцилиндрической формы с фаской и риской.
Соответствует ФСП.
Слайд 39
Методика определения
посторонней примеси:
4-аминоантипирина
Слайд 40
Методика:
Система растворителей:
хлороформ-спирт метиловый (9:1)
Заливается в камеру, насыщение
парами -30 мин.
1,1г порошка растертых таблеток (точная
навеска) помещают в
колбу на 50 мл,
прибавляют 25 мл хлороформа, встряхивают
5 мин., фильтруют через бумажный фильтр.
а = 1,0995
Слайд 41
200 мкг – 0,005 мл полученного фильтрата наносят
микрошприцом на линию старта пластинки Силуфол УФ-254
Рядом наносят 0,005
мл 0,02% раствора стандартного образца вещества свидетеля (4-аминоантипирин в хлороформе) - СОВС
Слайд 42
Фронт подвижной фазы – 15 см
После хроматографирования пластинку
сушат в токе воздуха и просматривают в УФ-свете при
длине волны 254 нм
Слайд 43
Rf анальгина -
(наблюдали одно четкое пятно, пятно
примеси
на уровне СОВС не обнаружили)
Rf 4-аминоантипирина (СОВС) –
(наблюдали
одно четкое пятно)
Соответствует ФСП (не более 0,5 % в препарате)